發(fā)布時間：2023-05-03 13:13

　　豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type2, PCV2）是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（Post-weaning multisystemic wasting syndrome, PMWS）的主要病原，該病原現(xiàn)已在世界各地廣泛流行，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。PCV2含2個主要的開放閱讀框ORF1和ORF2，分別編碼與病毒復(fù)制相關(guān)的蛋白Rep和Rep’以及病毒的結(jié)構(gòu)蛋白Cap。Cap蛋白是PCV2的主要免疫保護(hù)性抗原，能誘導(dǎo)動物機體產(chǎn)生針對PCV2的中和抗體和保護(hù)性免疫力，是研制PCV2基因工程疫苗的理想靶抗原。研究表明，IFN-γ、IL-2和GM-CSF等細(xì)胞因子佐劑對疫苗具有免疫增強作用，可顯著增強疫苗的免疫保護(hù)效力。本研究采用細(xì)胞因子佐劑與PCV2-Cap蛋白組合的策略來研制預(yù)防PCV2感染的新型基因工程亞單位疫苗，目的是驗證豬源IFN-γ（PoIFN-γ）、IL-2（PoIL-2）和GM-CSF（PoGM-CSF）這3種細(xì)胞因子能否增強PCV2-Cap蛋白亞單位疫苗的免疫效力。 為鑒定PoIFN-γ對PCV2-Cap蛋白亞單位疫苗的免疫增強作用，以桿狀病毒表達(dá)...

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 PCV2 病原學(xué)
        1.1.1 分類
        1.1.2 理化特性
        1.1.3 基因組結(jié)構(gòu)與功能
    1.2 PCV2 疫苗的研究進(jìn)展
        1.2.1 滅活疫苗
        1.2.2 弱毒疫苗
        1.2.3 基因工程疫苗
        1.2.4 展望
    1.3 細(xì)胞因子佐劑研究進(jìn)展
        1.3.1 細(xì)胞因子概述
        1.3.2 干擾素
        1.3.3 白細(xì)胞介素
        1.3.4 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子
    1.4 FMDV 病原學(xué)
        1.4.1 分類
        1.4.2 形態(tài)結(jié)構(gòu)和理化特性
        1.4.3 基因組結(jié)構(gòu)與功能
    1.5 FMDV 疫苗的研究進(jìn)展
        1.5.1 滅活疫苗
        1.5.2 弱毒疫苗
        1.5.3 基因工程疫苗
        1.5.4 展望
    1.6 研究的目的和意義
第二章 豬 IFN-γ對 PCV2-Cap 蛋白亞單位疫苗免疫增強作用的研究
    摘要
    2.1 材料和方法
        2.1.1 質(zhì)粒、菌株、細(xì)胞和主要試劑
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 重組桿狀病毒的構(gòu)建
        2.1.4 目的蛋白的表達(dá)及鑒定
        2.1.5 三種 PCV2 亞單位疫苗的制備
        2.1.6 鼠體免疫攻毒試驗
        2.1.7 血清學(xué)試驗
        2.1.8 淋巴細(xì)胞增殖試驗
        2.1.9 PCV2 病毒血癥檢測
        2.1.10 熒光定量 PCR 檢測 PCV2 病毒載量
        2.1.11 統(tǒng)計分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 目的基因的 PCR 擴增
        2.2.2 重組轉(zhuǎn)移載體的鑒定
        2.2.3 重組桿粒的 PCR 鑒定
        2.2.4 目的蛋白表達(dá)的鑒定
        2.2.5 PCV2 特異性體液免疫應(yīng)答
        2.2.6 PCV2 特異性淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)
        2.2.7 PCV2 病毒血癥檢測
        2.2.8 PCV2 病毒載量檢測
    2.3 討論
第三章 豬 IL-2 與豬 GM-CSF 對 PCV2-Cap 蛋白亞單位疫苗免疫增強作用的研究
    摘要
    3.1 材料和方法
        3.1.1 質(zhì)粒、菌株、細(xì)胞和主要試劑
        3.1.2 主要儀器設(shè)備
        3.1.3 重組桿狀病毒的構(gòu)建
        3.1.4 目的蛋白的表達(dá)及鑒定
        3.1.5 五種 PCV2 亞單位疫苗的制備
        3.1.6 鼠體免疫攻毒試驗
        3.1.7 PCV2 特異性 IPMA 抗體檢測
        3.1.8 淋巴細(xì)胞增殖試驗
        3.1.9 細(xì)胞因子檢測
        3.1.10 PCV2 病毒血癥檢測
        3.1.11 PCV2 病毒載量檢測
        3.1.12 統(tǒng)計分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 重組轉(zhuǎn)移載體的鑒定
        3.2.2 重組桿粒的 PCR 鑒定
        3.2.3 目的蛋白表達(dá)的 Western blot 鑒定
        3.2.4 PCV2 特異性 IPMA 抗體檢測
        3.2.5 PCV2 特異性淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)
        3.2.6 細(xì)胞因子檢測
        3.2.7 PCV2 病毒血癥檢測
        3.2.8 PCV2 病毒載量檢測
    3.3 討論
第四章 PCV2-Cap 蛋白與 FMDV-Vp1 蛋白共表達(dá)及免疫原性鑒定
    摘要
    4.1 材料和方法
        4.1.1 質(zhì)粒、菌株、細(xì)胞和主要試劑
        4.1.2 主要儀器設(shè)備
        4.1.3 重組桿狀病毒的構(gòu)建
        4.1.4 目的蛋白的表達(dá)及鑒定
        4.1.5 PCV2 與 FMDV 二聯(lián)亞單位疫苗的制備
        4.1.6 鼠體免疫試驗
        4.1.7 PCV2 特異性 IPMA 抗體檢測
        4.1.8 FMDV 特異性抗體檢測
        4.1.9 統(tǒng)計分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 目的基因的 PCR 擴增
        4.2.2 重組轉(zhuǎn)移載體的鑒定
        4.2.3 重組桿粒的 PCR 鑒定
        4.2.4 目的蛋白表達(dá)的 Western blot 鑒定
        4.2.5 PCV2 特異性 IPMA 抗體檢測
        4.2.6 FMDV 特異性抗體檢測
    4.3 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號：3806766