口蹄疫(foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒(FMD virus，F(xiàn)MDV)感染偶蹄獸所引起的一種急性、發(fā)熱性、高度接觸性傳染病。目前本病尚無有效的預防控制措施。清除病毒感染需要活化的CD8+T細胞、Th1應(yīng)答與高水平的中和抗體，但對于外源性抗原，則需要CD8α+DCs以抗原交叉提呈的方式激活CD8+T細胞。體外實驗發(fā)現(xiàn)，被A型清道夫受體（SR-A）抑制劑處理的樹突狀細胞(DCs)提呈重組FMDV結(jié)構(gòu)蛋白VP1-VP4的能力非但沒有被抑制，反而還顯著增強，這表明SR-A識別VP1-VP4對DCs啟動的細胞免疫應(yīng)答具有負調(diào)節(jié)作用。據(jù)此，我們給小鼠腹腔注射番瀉苷B或單寧酸以阻斷SR-A與VP1-VP4的結(jié)合，靜脈注射細胞色素C以清除小鼠體內(nèi)的CD8α+DCs，然后分別給上述小鼠皮下注射VP1-VP4與IMS251cVG佐劑混合所制成的試驗疫苗，并以單獨注射VP1-VP4蛋白或商用口蹄疫滅活疫苗為對照，通過檢測各組小鼠血清IFN-γ與IL-4的含量和抗體效價與各類型抗體的含量，以揭示SR-A和CD8α+DCs在機體產(chǎn)生抗FMDV免疫應(yīng)答中的作用。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
縮略詞索引表
1 引言
    1.1 口蹄疫研究進展
        1.1.1 口蹄疫流行病學研究
        1.1.2 口蹄疫病毒研究進展
        1.1.3 口蹄疫疫苗研究進展
    1.2 口蹄疫細胞免疫研究
    1.3 口蹄疫體液免疫研究
    1.4 細胞對FMDV的模式識別與適應(yīng)性免疫應(yīng)答
    1.5 本研究的目的和意義
2 實驗材料和方法
    2.1 主要實驗材料
    2.2 主要儀器設(shè)備
    2.3 實驗相關(guān)試劑的配制
        2.3.1 重組菌的培養(yǎng)和誘導表達用液
        2.3.2 SDS-PAGE 相關(guān)溶液
        2.3.3 電洗脫用液
        2.3.4 溶解細胞色素 C 與番瀉苷 B 用液的配制
    2.4 實驗方法
        2.4.1 重組口蹄疫病毒 VP1-VP4 蛋白的制備
        2.4.2 菌株選擇
        2.4.3 重組菌的誘導表達
        2.4.4 SDS-PAGE 凝膠的制備
        2.4.5 表達產(chǎn)物蛋白的 SDS- PAGE 電泳
        2.4.6 目的蛋白的回收純化及電洗脫
        2.4.7 蛋白質(zhì)濃度的測定
    2.5 實驗動物的分組與處理
    2.6 待檢測血清樣品的收集與檢測
    2.7 統(tǒng)計處理
3.實驗結(jié)果與分析
    3.1 實驗結(jié)果
        3.1.1 Pet32a-VP1-VP4 原核表達、純化及純度鑒定
        3.1.2 SR-A 抑制劑降低免疫 VP1-VP4 蛋白小鼠血清 IFN-γ和 IL-4 含量
        3.1.3 抑制 SR-A 對免疫 VP1-VP4 抗原小鼠體液免疫應(yīng)答的作用
        3.1.4 清除體內(nèi) CD8α+ DCs 對免疫 VP1-VP4 蛋白小鼠血清 IFN-γ和 IL-4 含量以及體液免疫應(yīng)答的作用
        3.1.5 清除 CD8α+ DCs 對免疫 VP1-VP4 蛋白小鼠血清抗體效價的影響
        3.1.6 注射 VP1-VP4 蛋白試驗疫苗誘導的免疫應(yīng)答
    3.2 分析
4 結(jié)論
    4.1 在體內(nèi)情況下，SR-A 識別 VP1-VP4 對小鼠啟動 IFN-γ應(yīng)答具有負調(diào)節(jié)作用
    4.2 CD8α⁺DCs 在體內(nèi)情況下，主要通過 MHC-II 類分子途徑激活 CD4⁺T 細胞，產(chǎn)生以IL-4 為特征的細胞免疫應(yīng)答
    4.3 體內(nèi)抑制 SR-A 或清除體內(nèi) CD8α⁺DCs 導致免疫應(yīng)答轉(zhuǎn)向 Th1 應(yīng)答
    4.4 體內(nèi)抑制 SR-A 或清除體內(nèi) CD8α⁺DCs 有利于粘膜免疫應(yīng)答
    4.5 番瀉苷 B 或單寧酸作為口蹄疫蛋白質(zhì)疫苗的佐劑成分是可行的
參考文獻
在讀期間發(fā)表的學術(shù)論文
作者簡歷
致謝



本文編號：3805457