本實(shí)驗(yàn)旨在研究miR-374b及其靶基因Myf6調(diào)控肌細(xì)胞增殖分化的作用機(jī)制。首先采集70日齡胎羊,培養(yǎng)成肌細(xì)胞并誘導(dǎo)分化成肌管,通過(guò)熒光定量PCR測(cè)定誘導(dǎo)分化時(shí)期(0、24、72、120 h)miR-374b、Myf6基因以及成肌細(xì)胞增殖標(biāo)志基因MyoD和分化標(biāo)志基因MyoG、MyHC在mRNA水平的表達(dá)量;通過(guò)轉(zhuǎn)染miR-374b過(guò)表達(dá)載體(mimics)及抑制載體(inhibitor),研究各基因在細(xì)胞中mRNA水平的表達(dá)規(guī)律;采用蛋白免疫印跡技術(shù)檢測(cè)Myf6基因在細(xì)胞中蛋白水平表達(dá)變化規(guī)律。結(jié)果表明:細(xì)胞在分化第72、120小時(shí)出現(xiàn)大量肌管,誘導(dǎo)分化成功;miR-374b的表達(dá)趨勢(shì)為先上升后下降,細(xì)胞增殖標(biāo)志基因MyoD在細(xì)胞增殖期(0 h)表達(dá)量較高;分化標(biāo)志基因MyHC、MyoG及Myf6基因在細(xì)胞增殖期表達(dá)量較低,進(jìn)入分化階段后表達(dá)量極顯著上調(diào);轉(zhuǎn)染miR-374b過(guò)表達(dá)載體(mimics)后,miR-374b表達(dá)量極顯著高于陰性對(duì)照組,而Myf6基因、MyHC基因表達(dá)量極顯著低于陰性對(duì)照組;Myf6基因蛋白表達(dá)量極顯著低于陰性對(duì)照組;轉(zhuǎn)染miR-374b抑制載體(inh...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及樣品采集
    1.2 成肌細(xì)胞分離培養(yǎng)
    1.3 誘導(dǎo)成肌細(xì)胞分化
    1.4 不同分化時(shí)期實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    1.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    1.6 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    1.7 Western blot檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 成肌細(xì)胞的體外分化
    2.2 不同分化時(shí)期基因表達(dá)量
    2.3 miR-374b調(diào)控Myf6及各標(biāo)志基因的表達(dá)
3 討論
4 結(jié)論



本文編號(hào)：3805555