布魯氏菌(Brucella)是革蘭陰性兼性胞內(nèi)寄生菌,能在家畜和人類間廣泛傳播而引起人和動(dòng)物感染布魯氏菌病。布魯氏菌病屬于慢性疾病,可能持續(xù)數(shù)周或數(shù)月,如果不能被有效治療,就會(huì)引起肝臟,脾臟,淋巴結(jié),骨髓,生殖系統(tǒng)以及骨骼系統(tǒng)出現(xiàn)病理變化。子宮內(nèi)膜細(xì)胞是布魯氏菌主要的靶細(xì)胞之一,已有的研究結(jié)果表明布魯氏菌在宿主細(xì)胞內(nèi)生存主要與宿主細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)緊密相關(guān)。布魯菌LPS即布魯菌脂多糖作為一種重要致病因子對(duì)布魯氏菌在胞內(nèi)生存和復(fù)制過(guò)程中起關(guān)鍵性作用。細(xì)菌裂解后會(huì)釋放出LPS,大量LPS對(duì)脊椎動(dòng)物(尤其是易感動(dòng)物)的主要作用是通過(guò)與免疫細(xì)胞的特異性受體相互結(jié)合而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。本試驗(yàn)通過(guò)提取布魯氏菌的LPS侵染山羊子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞(EEC),檢測(cè)(1)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志性分子GRP78和CHOP蛋白表達(dá)量變化,以及UPR通路中IRE1和ATF6蛋白表達(dá)變化,并對(duì)細(xì)胞自噬、凋亡以及炎癥的影響;(2)加入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑4苯基丁酸(4-PBA)通過(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激來(lái)驗(yàn)證內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細(xì)胞凋亡、自噬和炎癥的關(guān)系。試驗(yàn)結(jié)果如下:1.采用熱酚法提取純化布魯氏菌LPS,銀染鑒定提取了的布魯氏菌LPS;并...

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
文獻(xiàn)綜述
    第一章 布魯氏菌的研究進(jìn)展
        1.1 布魯氏菌LPS的結(jié)構(gòu)和感染機(jī)制
        1.2 布魯氏菌LPS引起的炎癥和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)系
            1.2.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
            1.2.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和炎癥的相互關(guān)系
        1.3 細(xì)胞凋亡與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        1.4 細(xì)胞自噬的研究進(jìn)展
        1.5 NLRP3炎癥小體的研究進(jìn)展
        1.6 本試驗(yàn)研究目的及主要內(nèi)容
試驗(yàn)研究
    第二章 布魯氏菌LPS的提取純化和鑒定
        2.1 試驗(yàn)材料及儀器設(shè)備
            2.1.1 菌株和細(xì)胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 方法
            2.2.1 布魯氏菌的培養(yǎng)
            2.2.2 布魯氏菌LPS粗品制備
            2.2.3 布魯氏菌LPS的純化
            2.2.4 布魯氏菌LPS銀染鑒定
            2.2.5 硫酸-苯酚法測(cè)布魯氏菌LPS濃度
            2.2.6 山羊子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.2.7 CCK8法測(cè)布魯菌LPS對(duì)山羊EEC最適作用濃度
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 布魯氏菌LPS銀染鑒定結(jié)果
            2.3.2 布魯氏菌LPS濃度測(cè)定結(jié)果
            2.3.3 CCK8毒性試驗(yàn)結(jié)果
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 布魯氏菌LPS對(duì)山羊子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的影響
        3.1 試驗(yàn)材料
            3.1.1 細(xì)胞系
            3.1.2 主要試劑
            3.1.3 主要儀器
        3.2 試驗(yàn)方法
            3.2.1 山羊子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的培養(yǎng)
            3.2.2 山羊子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的處理
            3.2.3 布魯氏菌LPS對(duì)EEC內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白表達(dá)量影響
            3.2.4 布魯氏菌LPS侵染山羊EEC內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激UPR反應(yīng)相關(guān)分子mRNA表達(dá)影響
            3.2.5 布魯氏菌LPS對(duì)山羊EEC的UPR通路中IRE1、ATF6活性的檢測(cè)
            3.2.6 布魯氏菌LPS對(duì)山羊EEC凋亡變化
            3.2.7 布魯氏菌LPS對(duì)山羊EECCyt-cmRNA表達(dá)影響
            3.2.8 布魯氏菌LPS對(duì)山羊EEC自噬的影響
            3.2.9 布魯氏菌LPS對(duì)山羊EEC炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-8和NLRP3炎癥小體相關(guān)因子mRNA水平的變化
            3.2.10 布魯氏菌LPS對(duì)EEC炎性細(xì)胞因子IL-1β的分泌
            3.2.11 布魯氏菌LPS對(duì)EEC炎性細(xì)胞因子IL-8的分泌
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 布魯氏菌LPS對(duì)山羊EEC內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白表達(dá)量變化
            3.3.2 布魯氏菌LPS對(duì)山羊EEC內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激UPR信號(hào)通路的激活作用
            3.3.3 布魯氏菌LPS對(duì)山羊EEC的IRE1、ATF6信號(hào)通路蛋白表達(dá)影響
            3.3.4 布魯氏菌LPS對(duì)山羊EEC凋亡的影響
            3.3.5 布魯氏菌LPS對(duì)山羊EEC自噬的影響
            3.3.6 布魯氏菌LPS對(duì)山羊EECNLRP3炎癥小體相關(guān)因子的影響
            3.3.7 布魯氏菌LPS對(duì)山羊EEC炎性細(xì)胞因子IL-1β和IL-8分泌的影響
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)對(duì)布魯氏菌LPS刺激山羊EEC的影響
        4.1 試驗(yàn)材料及儀器設(shè)備
            4.1.1 細(xì)胞系
            4.1.2 主要試劑
            4.1.3 主要儀器
        4.2 試驗(yàn)方法
            4.2.1 山羊子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的培養(yǎng)
            4.2.2 山羊子宮內(nèi)膜細(xì)胞的處理
            4.2.3 Western Blot檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白GRP78、CHOP和相關(guān)通路蛋白的表達(dá)
            4.2.4 4-PBA對(duì)布魯氏菌LPS侵染山羊EEC后凋亡的影響
            4.2.5 4-PBA對(duì)布魯氏菌LPS侵染山羊EEC凋亡標(biāo)志因子Cyt-c mRNA的表達(dá)
            4.2.6 4-PBA對(duì)布魯氏菌LPS侵染山羊EEC自噬的影響
            4.2.7 4-PBA對(duì)布魯氏菌LPS侵染山羊EEC炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-8和NLRP3炎癥小體相關(guān)因子mRNA的變化
            4.2.8 4-PBA對(duì)布魯氏菌LPS侵染EEC炎性因子IL-1β的分泌
            4.2.9 4-PBA對(duì)布魯氏菌LPS侵染EEC炎性因子IL-8 的分泌
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 4-PBA對(duì)布魯氏菌LPS侵染山羊EEC內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白表達(dá)的影響
            4.3.2 4-PBA對(duì)布魯氏菌LPS侵染山羊EEC凋亡的影響
            4.3.3 4-PBA對(duì)布魯氏菌LPS侵染山羊EEC自噬的影響
            4.3.4 4-PBA對(duì)布魯氏菌LPS侵染山羊EECNLRP3炎癥小體的影響
            4.3.5 4-PBA對(duì)布魯氏菌LPS侵染山羊EEC的IL-1β、IL-8分泌的影響
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
縮略詞
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3795094