偽狂犬病(Pseudorabies,PR)又名奧耶茲氏病,是由豬皰疹病毒I型(Suid heipesvirus I,SuHV-I)亦稱偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的豬、牛、羊等多種家畜及野生動物的一種烈性傳染病。免疫接種經(jīng)典PRV Bartha-K61弱毒疫苗是防控偽狂犬病的有效途徑之一。然而,近年來在我國很多地區(qū)的偽狂犬病疫苗免疫豬群中接連爆發(fā)了新的偽狂犬病疫情。研究表明,目前流行的偽狂犬病病毒(PRV)為變異株,這些變異株屬于PRV基因II型。傳統(tǒng)的Bartha-K61疫苗不能針對當前流行的變異株提供完全的保護。因此,需要對當前流行的PRV變異株進行快速致弱以及對PRV進行有效的防控。成簇規(guī)律間隔短回文重復(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)RNA系統(tǒng)是一種廣泛存在于細菌和古細菌中的由RNA介導的可遺傳性的獲得性免疫系統(tǒng),這種免疫系統(tǒng)為宿主細胞提供了對外源基因(如噬菌體質粒)的免疫功能。在II型CRISPR系統(tǒng)中CRISPR-Derived RNA(crRNA)通過...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
前言
第一章 文獻綜述
    1.1 偽狂犬病
        1.1.1 偽狂犬病病毒
        1.1.2 病原學
        1.1.3 病毒的分子生物學特點
        1.1.4 偽狂犬病在我國流行趨勢
        1.1.5 PRV的臨床癥狀
        1.1.6 PRV疫苗研究進展及防御措施
    1.2 CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)
        1.2.1 CRISPR/Cas9的簡介
        1.2.2 CRISPR/Cas9工作原理
    1.3 研究目的與意義
第二章 有效sgRNA的篩選
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 結果
        2.2.1 sgRNA質粒的構建
        2.2.2 CRISPR/Cas9載體功能驗證
    2.3 討論
    2.4 小結
第三章 非同源末端連接修復及其效率檢測
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 結果
    3.3 討論
    3.4 小結
第四章 gE基因缺失病毒毒株的篩選與毒力實驗
    4.1 材料方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
    4.2 結果
        4.2.1 PCR反應驗證gE基因缺失病毒毒株
        4.2.2 蛋白表達驗證PRV gE基因缺失突變毒株
        4.2.3 gE基因缺失病毒體外生長實驗
        4.2.4 PRV gE基因缺失毒株病毒的毒力實驗
    4.3 討論
    4.4 小結
第五章 gE/gI及gE/gI/TK基因缺失毒株構建及體外實驗與病毒毒力及免疫保護實驗
    5.1 材料方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 方法
    5.2 結果
        5.2.1 gE/gI雙基因缺失病毒篩選與純化
        5.2.2 gE/gI雙基因缺失病毒體外生長實驗
        5.2.3 gE/gI雙基因缺失毒株病毒的毒力實驗
        5.2.4 gE/gI/TK三基因缺失病毒的篩選與純化
        5.2.5 gE/gI/TK三基因缺失病毒體外生長實驗
        5.2.6 gE/gI/TK三基因缺失毒株病毒的毒力及免疫保護實驗
    5.3 討論
    5.4 小結
結論
參考文獻
附錄
作者簡介
致謝



本文編號：3792047