豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的豬流行性腹瀉是一種以嘔吐、水樣腹瀉和脫水為特征的急性接觸性腸道傳染病,是嚴(yán)重制約養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要病毒性傳染病之一。2010年以來(lái),PEDV在我國(guó)各地豬群中大規(guī)模爆發(fā),市場(chǎng)上以CV777毒株為抗原制備的疫苗免疫后效果并不理想,接種過(guò)該疫苗的豬場(chǎng)仍有此病的發(fā)生。除了飼養(yǎng)管理因素外,地方流行毒株的變異也可能是導(dǎo)致免疫失敗的一個(gè)重要原因。2012年,豬丁型冠狀病毒(Porcine deltaconoravirus,PDCoV)首次被我國(guó)香港學(xué)者發(fā)現(xiàn),隨后各省份也出現(xiàn)相關(guān)報(bào)道。PDCoV與PEDV同屬冠狀病毒,臨床癥狀極相似,目前尚未有針對(duì)PDCoV的商品化疫苗出現(xiàn)。本研究基于PEDV和PDCoV河北分離株,試制豬丁型冠狀病毒、豬流行性腹瀉病毒二聯(lián)滅活疫苗,同時(shí)接種Balb/c小鼠研究免疫原性。具體研究?jī)?nèi)容如下:為了提高滅活疫苗中抗原含量,本研究對(duì)PEDV和PDCoV的體外培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化,分別從最佳病毒接種劑量、病毒吸附后維持液用量和最佳收毒時(shí)間三個(gè)方面進(jìn)行探索。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)PEDV HB-HS株...

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要 abstract 縮寫詞表 1 引言
1.1 豬流行性腹瀉病毒概述
    1.1.1 豬流行性腹瀉概述
    1.1.2 PEDV生物學(xué)特性
    1.1.3 PEDV的培養(yǎng)特性
    1.1.4 PEDV流行病學(xué)
    1.1.5 PEDV的檢測(cè)方法
    1.1.6 PEDV疫苗的研究進(jìn)展
1.2 豬丁型冠狀病毒及其研究概述
    1.2.1 豬丁型冠狀病毒概述
    1.2.2 PDCoV生物學(xué)特性
    1.2.3 PDCoV培養(yǎng)特性
    1.2.4 PDCoV流行病學(xué)
    1.2.5 PDCoV的檢測(cè)方法
    1.2.6 PDCoV疫苗的研究進(jìn)展
1.3 多聯(lián)疫苗的研究進(jìn)展和應(yīng)用
1.4 研究目的及意義 2 材料與方法
2.1 材料
    2.1.1 病毒、細(xì)胞系、菌株、疫苗
    2.1.2 主要試劑和耗材
    2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.1.4 主要試劑和培養(yǎng)基的配置
    2.1.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
2.2 方法
    2.2.1 豬丁型冠狀病毒和豬流行性腹瀉病毒培養(yǎng)條件的確定
    2.2.2 豬丁型冠狀病毒和流行性腹瀉病毒液的制備
    2.2.3 細(xì)胞毒的鑒定
    2.2.4 豬丁型冠狀病毒和豬流行性腹瀉病毒TCID50 的測(cè)定
    2.2.5 疫苗的制備
    2.2.6 疫苗的檢驗(yàn)
    2.2.7 疫苗免疫原性檢測(cè)方法的建立
    2.2.8 豬丁型冠狀病毒-豬流行性腹瀉病毒二聯(lián)滅活疫苗小鼠免疫實(shí)驗(yàn) 3 結(jié)果
3.1 豬丁型冠狀病毒和豬流行性腹瀉病毒培養(yǎng)條件
3.2 PDCoV和 PEDV的增殖曲線和最佳收毒時(shí)間
3.3 疫苗的制備
    3.3.1 豬流行性腹瀉病毒和豬丁型冠狀病毒液的制備
    3.3.2 病毒液的PCR鑒定
    3.3.3 豬流行性腹瀉和豬丁型冠狀病毒TCID50 測(cè)定結(jié)果
    3.3.4 病毒液的濃縮
    3.3.5 豬流行性腹瀉病毒液和豬丁型冠狀病毒液的無(wú)菌檢驗(yàn)及滅活檢驗(yàn)
3.4 滅活疫苗的檢驗(yàn)
    3.4.1 滅活疫苗的物理性狀檢驗(yàn)
    3.4.2 滅活疫苗的無(wú)菌檢驗(yàn)及細(xì)胞病變檢驗(yàn)
    3.4.3 滅活疫苗的安全性檢驗(yàn)
3.5 疫苗免疫原性檢測(cè)方法的建立
    3.5.1 重組蛋白的原核表達(dá)及重組蛋白的鑒定
    3.5.2 間接ELISA方法的建立及優(yōu)化結(jié)果
    3.5.3 陰陽(yáng)性臨界值的確定
3.6 PEDV-PDCoV 二聯(lián)滅活疫苗免疫原性實(shí)驗(yàn)
    3.6.1 不同劑量二聯(lián)滅活疫苗免疫小鼠后PEDV ELISA抗體的消長(zhǎng)規(guī)律
    3.6.2 不同劑量二聯(lián)滅活疫苗免疫小鼠后PDCoV ELISA抗體的消長(zhǎng)規(guī)律
    3.6.3 不同滅活疫苗免疫效果差異 4 討論
4.1 病毒培養(yǎng)和病毒液濃縮
4.2 二聯(lián)滅活疫苗的制備
4.3 ELISA檢測(cè)方法的建立
4.4 疫苗免疫原性 5 結(jié)論 參考文獻(xiàn) 在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 作者簡(jiǎn)介 致謝



本文編號(hào)：3789543