口蹄疫病毒(FMDV)是小RNA病毒科(Picornaviridae)口瘡病毒屬(Aphthovirus)的成員，引起的口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)是一種急性、烈性、高度傳染性的病毒病，主要感染牛、羊、豬、鹿等偶蹄類動物。本病除了直接引起幼畜死亡、減少動物體重和產(chǎn)奶量，還導(dǎo)致全球范圍內(nèi)動物及動物產(chǎn)品的國際貿(mào)易限制，造成嚴重的經(jīng)濟損失，是對偶蹄動物威脅最大的傳染病。目前廣泛使用的全病毒滅活疫苗在應(yīng)用過程中發(fā)現(xiàn)諸多不足，開發(fā)新型疫苗來彌補這些不足顯得極為迫切。FMDV結(jié)構(gòu)蛋白VP1上存在重要的B細胞和T細胞表位參與構(gòu)成主要抗原位點。故本研究構(gòu)建了基于VP1的融合蛋白病毒樣顆粒(VLPs)，來研究該融合VLPs的組裝情況及免疫效果。 本研究根據(jù)FMDV Asia1/JS/CHA/05序列和牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)流行株BVDV JZ05-1序列，選擇BVDV核心蛋白P14，第169²70位氨基酸和FMDV結(jié)構(gòu)蛋白VP1的第1²11位氨基酸，兩者之間設(shè)計柔性肽SGSPSGPGSG連接，通過融合PCR獲取P14-...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第1章 引言
    1.1 口蹄疫病毒研究概況
        1.1.1 病毒結(jié)構(gòu)及理化特性
        1.1.2 病毒基因組結(jié)構(gòu)及其功能
        1.1.3 病毒結(jié)構(gòu)蛋白的結(jié)構(gòu)及功能
        1.1.4 病毒抗原位點
    1.2 口蹄疫疫苗研究概況
        1.2.1 滅活疫苗
        1.2.2 弱毒疫苗
        1.2.3 合成肽疫苗
        1.2.4 亞單位疫苗
        1.2.5 活載體疫苗
        1.2.6 核酸疫苗
    1.3 重組 VLP 疫苗研究概況
    1.4 牛病毒性腹瀉病毒結(jié)構(gòu)簡述
    1.5 研究的目的和意義
第2章 P14-VP1 融合蛋白在枯草芽孢桿菌中的表達
    2.1 材料
        2.1.1 菌株和質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 引物設(shè)計與合成
    2.2 方法
        2.2.1 P14-柔性肽-VP1 編碼序列的獲取
        2.2.2 穿梭表達質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.3 融合蛋白的表達
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 P14-柔性肽-VP1 編碼序列的獲取
        2.3.2 穿梭表達質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3.3 融合蛋白的表達
        2.3.4 VLPs 的透射電鏡檢測
    2.4 討論
        2.4.1 FMDV 融合 VLPs 疫苗的研究趨勢
        2.4.2 抗原蛋白與載體蛋白的選擇
        2.4.3 表達系統(tǒng)的選擇
第3章 P14-VP1 融合 VLPs 免疫原性研究
    3.1 材料
        3.1.1 細胞、試劑與實驗動物
        3.1.2 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 重組 VLPs 免疫小鼠
        3.2.2 免疫小鼠抗體檢測
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 P14-VP1 融合蛋白 VLPs 誘導(dǎo)產(chǎn)生的 IgG 抗體
        3.3.2 P14-VP1 融合蛋白 VLPs 誘導(dǎo)產(chǎn)生的中和抗體
    3.4 討論
        3.4.1 VLPs 誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫強度和持續(xù)時間
        3.4.2 VLPs 誘導(dǎo)的抗體特異性
第4章 結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3786794