鴨瘟病毒(duck plague virus,DPV)屬皰疹病毒科(herpesvirales)α皰疹病毒亞科(Alphaherpesvirinae),可引起禽類急性敗血癥,對世界各國水禽業(yè)具有嚴(yán)重危害性。皰疹病毒micro RNA(mi RNA)的數(shù)量占病毒mi RNA總數(shù)的90%以上,其多數(shù)成員編碼的mi RNA研究已有較大進(jìn)展,但關(guān)于鴨瘟病毒mi RNA的研究報(bào)道甚少。本研究以對病毒復(fù)制具有重要調(diào)控作用的立即早期基因ICP4為目的基因,結(jié)合實(shí)驗(yàn)室測序獲得的CHv株編碼的39個(gè)鴨瘟病毒mi RNA,篩選出靶向病毒ICP4基因的mi RNA,并對其功能進(jìn)行了初步研究,結(jié)果如下:1靶向鴨瘟病毒ICP4基因的mi RNA篩選預(yù)測結(jié)果顯示,mi R-D22-3p、mi R-D22-5p及mi R-D23-5p均完全互補(bǔ)于ICP4基因,本試驗(yàn)選擇由同一前體分化的mi R-D22-3p及mi R-D22-5p為篩選對象。將mi R-D22-5p mimics和NC mimics分別與熒光質(zhì)粒pmir GLO-ICP4-WT及pmir GLO-ICP4-MUT5p共轉(zhuǎn)染COS7細(xì)胞。結(jié)果表明,與...

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表(Abbreviations)
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 miRNA的研究
        1.1 miRNA生源途徑
        1.2 miRNA的調(diào)控途徑
            1.2.1 參與翻譯抑制
            1.2.2 參與降解mRNA
    2 禽皰疹病毒miRNA的研究
    3 皰疹病毒ICP4基因的研究
    4 研究目的與意義
第二章 試驗(yàn)研究
    1 材料
        1.1 毒株、質(zhì)粒和細(xì)胞等
        1.2 主要試劑及其配制
        1.3 主要儀器
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 靶向鴨瘟病毒ICP4基因的miRNA的篩選
            2.1.1 在線預(yù)測靶向鴨瘟病毒ICP4基因的miRNA
            2.1.2 雙熒光報(bào)告基因載體野生型及突變型的構(gòu)建
            2.1.3 轉(zhuǎn)染
            2.1.4 熒光檢測
        2.2 miR-D22-5p對鴨瘟病毒ICP4基因表達(dá)的影響
            2.2.1 熒光質(zhì)粒表達(dá)的檢測
            2.2.2 RT-qPCR檢測ICP4基因mRNA的表達(dá)
            2.2.3 miR-D22-5p對鴨瘟病毒ICP4基因蛋白表達(dá)的影響
        2.3 miR-D22-5p對鴨瘟病毒增殖的影響
            2.3.1 鴨瘟病毒液TCID50及病毒粒子拷貝數(shù)的檢測
            2.3.2 qPCR檢測不同時(shí)間點(diǎn)miRNA對鴨瘟病毒DNA拷貝數(shù)的影響
            2.3.3 qPCR不同濃度miRNA對鴨瘟病毒DNA拷貝數(shù)的影響
    3 結(jié)果
        3.1 靶向鴨瘟ICP4基因的miRNA篩選及驗(yàn)證
            3.1.1 在線預(yù)測靶向鴨瘟ICP4基因的候選miRNA
            3.1.2 雙熒光報(bào)告基因載體野生型及突變型的構(gòu)建
            3.1.3 熒光檢測
        3.2 miR-D22-5p對鴨瘟病毒ICP4基因表達(dá)的影響
            3.2.1 熒光質(zhì)粒表達(dá)的檢測
            3.2.2 miR-D22-5p對鴨瘟病毒ICP4基因mRNA表達(dá)的影響
            3.2.3 miR-D22-5p對鴨瘟病毒ICP4基因蛋白表達(dá)的影響
        3.3 miR-D22-5p對鴨瘟病毒增殖的影響
            3.3.1 鴨瘟病毒液TCID50及病毒粒子拷貝數(shù)
            3.3.2 不同時(shí)間點(diǎn)miRNA對鴨瘟病毒DNA拷貝數(shù)的影響
            3.3.3 不同濃度miRNA對鴨瘟病毒DNA拷貝數(shù)的影響
    4 討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號：3784684