豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)是嚴重危害我國生豬產(chǎn)業(yè)的重要病原。研究病毒編碼蛋白與宿主細胞蛋白之間的相互作用對于理解PRRSV的致病機制具有十分重要的意義。本研究在篩選、鑒定與PRRSV蛋白相互作用的細胞蛋白的基礎(chǔ)上,進一步分析了Nsp3與IFITM1、E蛋白與Tetherin、Nsp2與CD2AP之間相互作用的分子機制及其生物學意義,以期為闡明PRRSV的致病機制提供科學依據(jù)。 分別將含有PRRSV各個基因(除Nsp6和Nsp8)的酵母質(zhì)粒pGBKT7轉(zhuǎn)化酵母菌Y2H,進行細胞毒性和自激活實驗,結(jié)果表明,PRRSV的各個基因編碼的蛋白無細胞毒性和自激活現(xiàn)象。應用豬肺泡巨噬細胞(PAMs) cDNA文庫和酵母雙雜交技術(shù),分別篩選與Nsp2、Nsp9、Nsp10、Nsp11和Nsp12相互作用的細胞蛋白,將陽性克隆進行了質(zhì)粒提取和測序分析,并在NCBI上進行序列比對,確定了相應序列對應的基因和相互作用的候選蛋白。分別從PAMs中克隆固有抗病毒因子IFITM1、IFITM3、Tetherin、PKR、OAS、Mx1、ISG15和ISG56基因,并將克隆的片段構(gòu)建到pGADT7載體上,...

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
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附表清單
縮略詞表
第一章 引言
    1.1 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
    1.2 研究的目的和意義
    1.3 研究的內(nèi)容與技術(shù)路線
    1.4 研究目標
第二章 豬繁殖與呼吸綜合征病毒蛋白與宿主細胞相互作用蛋白的篩選與鑒定
    摘要
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
    2.3 結(jié)果與分析
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 豬繁殖與呼吸綜合征病毒Nsp3、E與IFITM1、Tetherin的相互作用
    摘要
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
    3.3 結(jié)果與分析
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 豬繁殖與呼吸綜合征病毒Nsp2與CD2AP的相互作用及其生物學意義
    摘要
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
    4.3 結(jié)果與分析
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 結(jié)論
第六章 創(chuàng)新點
第七章 文獻綜述
    7.1 細胞骨架的主要組分
    7.2 細胞骨架和病毒的生命周期
    7.3 細胞骨架對病毒的屏障作用
    7.4 結(jié)論與展望
參考文獻
致謝
附錄
作者簡介



本文編號：3784006