水貂阿留申病(Aleutian Mink Disease,AD)是由水貂阿留申病毒(Aleutian Mink Disease Virus,AMDV)感染引起的自身免疫功能發(fā)生紊亂、衰竭的慢性持續(xù)性傳染病。該病引起幼貂死亡和成年貂貂皮質(zhì)量和生殖力下降,嚴(yán)重影響了水貂養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。針對(duì)該病目前沒(méi)有商品化疫苗,貂場(chǎng)主要通過(guò)定期篩查、檢疫、淘汰陽(yáng)性個(gè)體達(dá)到種群的凈化。隨著我國(guó)水貂養(yǎng)殖業(yè)的飛速發(fā)展,開(kāi)展水貂的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化研究迫在眉睫,開(kāi)展疫病診斷和治療制劑研究前景廣闊。核酸適配體是從體外合成的寡核苷酸文庫(kù)中利用指數(shù)富集配體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(SELEX)篩選得到的單鏈核苷酸分子(RNA或ssDNA),通過(guò)折疊形成高級(jí)結(jié)構(gòu),與特定靶標(biāo)高效結(jié)合影響其生物學(xué)功能。核酸適配體以高親和力、高特異性、易修飾、可大量合成、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)勢(shì),在毒素、腫瘤細(xì)胞、致病菌和病毒等診斷技術(shù)研究中應(yīng)用廣泛。因此,核酸適配體作為單克隆抗體的有益補(bǔ)充,可為獸醫(yī)病原微生物研究提供新思路和新工具。本研究采用磁珠SELEX技術(shù)篩選了AMDV VP2蛋白的核酸適配體。經(jīng)過(guò)10輪篩選,獲得與靶蛋白具有明顯親和力的富集文庫(kù)。通過(guò)高通量測(cè)序、...

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 水貂阿留申病毒概述
        1.1.1 AMDV的分子生物學(xué)特性
        1.1.2 AMDV的致病機(jī)理
        1.1.3 AD的流行病學(xué)
        1.1.4 AD的診斷
        1.1.5 AD的防治
    1.2 適配體的概述
        1.2.1 SELEX技術(shù)
        1.2.2 適配體的特點(diǎn)
        1.2.3 適配體的篩選方法
        1.2.4 適配體的應(yīng)用
    展望
第二章 水貂阿留申病毒VP2蛋白適配體的篩選
    2.1 材料
        2.1.1 蛋白與主要試劑
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 試劑的配制
    2.2 方法
        2.2.1 蛋白偶聯(lián)磁珠
        2.2.2 文庫(kù)的構(gòu)建及引物合成
        2.2.3 PCR擴(kuò)增條件的優(yōu)化
        2.2.4 水貂阿留申病毒VP2蛋白適配體的篩選
        2.2.5 流式監(jiān)測(cè)篩選過(guò)程
        2.2.6 高通量測(cè)序分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 蛋白偶聯(lián)磁珠
        2.3.2 PCR擴(kuò)增條件的優(yōu)化結(jié)果
        2.3.3 水貂阿留申病毒VP2蛋白適配體的篩選
        2.3.4 流式監(jiān)測(cè)篩選過(guò)程
        2.3.5 高通量測(cè)序結(jié)果分析
    2.4 討論
第三章 AMDV VP2蛋白適配體的特性及結(jié)構(gòu)分析
    3.1 材料
        3.1.1 蛋白、病毒與抗體
        3.1.2 主要試劑與儀器
        3.1.3 試劑的配制
    3.2 方法
        3.2.1 適配體序列的合成
        3.2.2 適配體與AMDV VP2蛋白的親和力分析
        3.2.3 適配體與AMDV VP2蛋白的特異性分析
        3.2.4 優(yōu)勢(shì)適配體與AMDV標(biāo)準(zhǔn)抗原的親和力分析
        3.2.5 優(yōu)勢(shì)適配體的結(jié)構(gòu)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 適配體與AMDV VP2蛋白的親和力分析結(jié)果
        3.3.2 適配體與AMDV VP2蛋白的特異性分析結(jié)果
        3.3.3 優(yōu)勢(shì)適配體與AMDV標(biāo)準(zhǔn)抗原的親和力分析結(jié)果
        3.3.4 優(yōu)勢(shì)適配體的結(jié)構(gòu)分析結(jié)果
    3.4 討論
第四章 DAS-ELOSA檢測(cè)的建立
    4.1 材料
        4.1.1 細(xì)胞、病毒、抗體與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 主要試劑與儀器
    4.2 方法
        4.2.1 單克隆抗體的選擇
        4.2.2 腹水的制備與純化
        4.2.3 反應(yīng)條件的優(yōu)化
        4.2.4 判定標(biāo)準(zhǔn)的確定
        4.2.5 特異性分析
        4.2.6 敏感性分析
        4.2.7 符合率分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 單克隆抗體的選擇結(jié)果
        4.3.2 腹水的制備與純化結(jié)果
        4.3.3 條件優(yōu)化結(jié)果
        4.3.4 判定標(biāo)準(zhǔn)的確定
        4.3.5 特異性分析結(jié)果
        4.3.6 敏感性分析結(jié)果
        4.3.7 符合率分析結(jié)果
    4.4 討論
第五章 適配體對(duì)病毒復(fù)制的影響
    5.1 材料
        5.1.1 病毒、抗體與細(xì)胞
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器
    5.2 方法
        5.2.1 AMDV-Utah株感染體系建立
        5.2.2 AMDV實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增
        5.2.3 MTT試驗(yàn)
        5.2.4 細(xì)胞水平適配體對(duì)病毒復(fù)制的影響
        5.2.5 優(yōu)勢(shì)適配體的特性及結(jié)構(gòu)分析
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 AMDV-Utah株感染體系建立
        5.3.2 AMDV實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增
        5.3.3 MTT試驗(yàn)
        5.3.4 細(xì)胞水平適配體對(duì)病毒復(fù)制的影響
        5.3.5 優(yōu)勢(shì)適配體的特性及結(jié)構(gòu)分析結(jié)果
    5.4 討論
第六章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3783877