水貂阿留申病(Aleutian Mink Disease,AD)是由水貂阿留申病毒(Aleutian Mink Disease Virus,AMDV)感染引起的自身免疫功能發(fā)生紊亂、衰竭的慢性持續(xù)性傳染病。該病引起幼貂死亡和成年貂貂皮質量和生殖力下降,嚴重影響了水貂養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。針對該病目前沒有商品化疫苗,貂場主要通過定期篩查、檢疫、淘汰陽性個體達到種群的凈化。隨著我國水貂養(yǎng)殖業(yè)的飛速發(fā)展,開展水貂的實驗動物化研究迫在眉睫,開展疫病診斷和治療制劑研究前景廣闊。核酸適配體是從體外合成的寡核苷酸文庫中利用指數富集配體系統(tǒng)進化技術(SELEX)篩選得到的單鏈核苷酸分子(RNA或ssDNA),通過折疊形成高級結構,與特定靶標高效結合影響其生物學功能。核酸適配體以高親和力、高特異性、易修飾、可大量合成、化學性質穩(wěn)定等優(yōu)勢,在毒素、腫瘤細胞、致病菌和病毒等診斷技術研究中應用廣泛。因此,核酸適配體作為單克隆抗體的有益補充,可為獸醫(yī)病原微生物研究提供新思路和新工具。本研究采用磁珠SELEX技術篩選了AMDV VP2蛋白的核酸適配體。經過10輪篩選,獲得與靶蛋白具有明顯親和力的富集文庫。通過高通量測序、...

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【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 水貂阿留申病毒概述
        1.1.1 AMDV的分子生物學特性
        1.1.2 AMDV的致病機理
        1.1.3 AD的流行病學
        1.1.4 AD的診斷
        1.1.5 AD的防治
    1.2 適配體的概述
        1.2.1 SELEX技術
        1.2.2 適配體的特點
        1.2.3 適配體的篩選方法
        1.2.4 適配體的應用
    展望
第二章 水貂阿留申病毒VP2蛋白適配體的篩選
    2.1 材料
        2.1.1 蛋白與主要試劑
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 試劑的配制
    2.2 方法
        2.2.1 蛋白偶聯磁珠
        2.2.2 文庫的構建及引物合成
        2.2.3 PCR擴增條件的優(yōu)化
        2.2.4 水貂阿留申病毒VP2蛋白適配體的篩選
        2.2.5 流式監(jiān)測篩選過程
        2.2.6 高通量測序分析
    2.3 結果
        2.3.1 蛋白偶聯磁珠
        2.3.2 PCR擴增條件的優(yōu)化結果
        2.3.3 水貂阿留申病毒VP2蛋白適配體的篩選
        2.3.4 流式監(jiān)測篩選過程
        2.3.5 高通量測序結果分析
    2.4 討論
第三章 AMDV VP2蛋白適配體的特性及結構分析
    3.1 材料
        3.1.1 蛋白、病毒與抗體
        3.1.2 主要試劑與儀器
        3.1.3 試劑的配制
    3.2 方法
        3.2.1 適配體序列的合成
        3.2.2 適配體與AMDV VP2蛋白的親和力分析
        3.2.3 適配體與AMDV VP2蛋白的特異性分析
        3.2.4 優(yōu)勢適配體與AMDV標準抗原的親和力分析
        3.2.5 優(yōu)勢適配體的結構分析
    3.3 結果
        3.3.1 適配體與AMDV VP2蛋白的親和力分析結果
        3.3.2 適配體與AMDV VP2蛋白的特異性分析結果
        3.3.3 優(yōu)勢適配體與AMDV標準抗原的親和力分析結果
        3.3.4 優(yōu)勢適配體的結構分析結果
    3.4 討論
第四章 DAS-ELOSA檢測的建立
    4.1 材料
        4.1.1 細胞、病毒、抗體與實驗動物
        4.1.2 主要試劑與儀器
    4.2 方法
        4.2.1 單克隆抗體的選擇
        4.2.2 腹水的制備與純化
        4.2.3 反應條件的優(yōu)化
        4.2.4 判定標準的確定
        4.2.5 特異性分析
        4.2.6 敏感性分析
        4.2.7 符合率分析
    4.3 結果
        4.3.1 單克隆抗體的選擇結果
        4.3.2 腹水的制備與純化結果
        4.3.3 條件優(yōu)化結果
        4.3.4 判定標準的確定
        4.3.5 特異性分析結果
        4.3.6 敏感性分析結果
        4.3.7 符合率分析結果
    4.4 討論
第五章 適配體對病毒復制的影響
    5.1 材料
        5.1.1 病毒、抗體與細胞
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器
    5.2 方法
        5.2.1 AMDV-Utah株感染體系建立
        5.2.2 AMDV實時熒光定量PCR擴增
        5.2.3 MTT試驗
        5.2.4 細胞水平適配體對病毒復制的影響
        5.2.5 優(yōu)勢適配體的特性及結構分析
    5.3 結果
        5.3.1 AMDV-Utah株感染體系建立
        5.3.2 AMDV實時熒光定量PCR擴增
        5.3.3 MTT試驗
        5.3.4 細胞水平適配體對病毒復制的影響
        5.3.5 優(yōu)勢適配體的特性及結構分析結果
    5.4 討論
第六章 全文結論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3783877