鹿茸是指鹿科動(dòng)物頭部衍生的未骨化密生茸毛的幼角,是自然界惟一能夠周期性完全再生的哺乳動(dòng)物骨質(zhì)附屬器官,其組織學(xué)研究表明,從上到下呈現(xiàn)出完整的間充質(zhì)增殖分化為軟骨,軟骨被松質(zhì)骨替換,松質(zhì)骨重塑為密質(zhì)骨的過(guò)程,中國(guó)藥典規(guī)定梅花鹿和馬鹿鹿茸為我國(guó)傳統(tǒng)中藥,被譽(yù)為動(dòng)物藥之首。鹿茸不同組織結(jié)構(gòu)中粗蛋白、氨基酸、水溶性多糖、單糖、脂肪酸等物質(zhì)含量不同,傳統(tǒng)上鹿茸多以分區(qū)段出售,區(qū)段的劃分是根據(jù)鹿茸的內(nèi)、外部的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)特點(diǎn)從上到下分為蠟片區(qū)(wax-like,WL)、粉片區(qū)(blood-color,BC)、蜂片區(qū)(honeycomb-like,HL)和骨片區(qū)(bone slice,B),但是該分類缺乏分子水平方面的支撐。本研究旨在通過(guò)構(gòu)建鹿茸四區(qū)段的mRNA和microRNA(miRNA)的分子表達(dá)譜,找到不同差異的mRNA和miRNA,在分子水平上對(duì)鹿茸傳統(tǒng)的分區(qū)進(jìn)行再確認(rèn)。在此基礎(chǔ)上,鹿茸WL區(qū)段涵蓋生長(zhǎng)中心,通過(guò)差異分析的方法,找到WL區(qū)段與其他區(qū)段的差異基因,構(gòu)建mRNAmiRNA的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),并利用qRT-PCR和CCK8檢測(cè)對(duì)關(guān)鍵基因進(jìn)行功能驗(yàn)證,為研究鹿茸的快速生長(zhǎng)問(wèn)題提供依據(jù)。通...

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
附件
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 鹿茸概述
    1.2 鹿茸商業(yè)分區(qū)
    1.3 鹿茸轉(zhuǎn)錄組的研究
        1.3.1 鹿茸頂端不同發(fā)育時(shí)期轉(zhuǎn)錄組
        1.3.2 鹿茸頂端分層組織轉(zhuǎn)錄組
    1.4 鹿茸生長(zhǎng)發(fā)育關(guān)鍵調(diào)控因子的功能研究
    1.5 研究?jī)?nèi)容、目的和意義
第二章 鹿茸四區(qū)段mRNA組學(xué)研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 鹿茸四區(qū)段樣品采集
        2.1.2 總RNA的提取
        2.1.3 總RNA質(zhì)量評(píng)測(cè)
        2.1.4 測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建
        2.1.5 測(cè)序數(shù)據(jù)過(guò)濾
        2.1.6 參考序列比對(duì)分析
        2.1.7 序列的組裝注釋定量
        2.1.8 差異表達(dá)分析
        2.1.9 聚類分析
        2.1.10 GO顯著性富集分析
        2.1.11 mRNA熒光定量PCR驗(yàn)證
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 高質(zhì)量測(cè)序數(shù)據(jù)
        2.2.2 多元統(tǒng)計(jì)分析鑒定鹿茸分區(qū)
        2.2.3 鹿茸各區(qū)段差異表達(dá)的mRNAs
        2.2.4 差異基因GO功能注釋
        2.2.5 mRNA熒光定量PCR驗(yàn)證
        2.2.6 鹿茸各區(qū)段相對(duì)高表達(dá)的mRNAs
        2.2.7 各區(qū)段相對(duì)高表達(dá)mRNAs的功能分析
    2.3 討論
    2.4 本章小結(jié)
第三章 鹿茸四區(qū)段micro RNA組學(xué)研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 鹿茸樣品采集
        3.1.2 micro RNA的提取
        3.1.3 miRNA文庫(kù)構(gòu)建和上機(jī)測(cè)序
        3.1.4 測(cè)序數(shù)據(jù)過(guò)濾
        3.1.5 miRNAs比對(duì)、注釋及差異表達(dá)
        3.1.6 靶基因的預(yù)測(cè)
        3.1.7 聚類分析
        3.1.8 GO顯著性富集分析
        3.1.9 miRNA熒光定量PCR驗(yàn)證
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 高質(zhì)量測(cè)序數(shù)據(jù)
        3.2.2 miRNA的長(zhǎng)度分布圖
        3.2.3 多元統(tǒng)計(jì)分析鑒定鹿茸分區(qū)
        3.2.4 鹿茸各區(qū)段差異表達(dá)miRNAs
        3.2.5 差異miRNAs靶基因及功能注釋
        3.2.6 miRNA熒光定量PCR驗(yàn)證
        3.2.7 鹿茸各區(qū)段相對(duì)高表達(dá)的miRNA
        3.2.8 各區(qū)段相對(duì)高表達(dá)miRNAs靶基因及功能分析
    3.3 討論
    3.4 本章小結(jié)
第四章 鹿茸蠟片區(qū)間充質(zhì)層基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 mRNA-miRNA互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
        4.1.2 鹿茸蠟片區(qū)間充質(zhì)層細(xì)胞的采集與培養(yǎng)
        4.1.3 miRNA模擬物轉(zhuǎn)染
        4.1.4 CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力
        4.1.5 數(shù)據(jù)分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 mRNA-miRNA互作網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建
        4.2.2 鹿茸蠟片區(qū)間充質(zhì)層基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的功能富集
        4.2.3 miR-155 及其靶基因FOXO3 的功能驗(yàn)證
    4.3 討論
    4.4 本章小結(jié)
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3783285