豬輪狀病毒（PoRV），屬呼腸孤病毒科輪狀病毒屬，是引起各種幼齡動(dòng)物腹瀉的主要病原之一。豬輪狀病毒常與豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）混合感染，引起哺乳仔豬的嚴(yán)重腹瀉，出現(xiàn)嘔吐、脫水、高熱，死亡率極高。輪狀病毒幾乎在所有的豬群中存在，且可以通過乳汁由母豬感染仔豬。該病廣泛分布于世界各地，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。 輪狀病毒基因組由11個(gè)節(jié)段雙鏈RNA組成，編碼12種蛋白質(zhì)，其中包括結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP2、VP3、VP4、VP6、VP7和非結(jié)構(gòu)蛋白NSP1、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5。NSP4由病毒第十基因片段編碼，是最先被描述的病毒腸毒素。它是一個(gè)多功能的蛋白。為了幫助RV在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的成熟，NSP4在不引起病理變化的前提下，可以誘導(dǎo)新生小鼠的腹瀉。NSP4融合蛋白的表達(dá)可以提高內(nèi)源鈣離子水平，感染的腸上皮細(xì)胞遭到破壞而導(dǎo)致吸收不良。它的內(nèi)毒素活性也可能是引起腹瀉的一種機(jī)制。另外，在RV感染病人體內(nèi)存在NSP4特異性IgA和IgG血清轉(zhuǎn)化，表明NSP4可以暴露于免疫細(xì)胞。 本研究通過RT-PCR的方法擴(kuò)增了豬輪狀病毒NSP4蛋白的基因，將其克隆...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 輪狀病毒概述
        1.1.1 輪狀病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)
        1.1.2 輪狀病毒的理化特性
        1.1.3 輪狀病毒的基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.1.4 輪狀病毒結(jié)構(gòu)蛋白及功能
        1.1.5 輪狀病毒非結(jié)構(gòu)蛋白及功能
        1.1.6 流行病學(xué)
    1.2 輪狀病毒抗原表位研究進(jìn)展
    1.3 抗原表位研究方法
        1.3.1 T 細(xì)胞抗原表位研究方法
        1.3.2 B 細(xì)胞抗原表位研究方法
    1.4 研究目的和意義
第二章 輪狀病毒 NSP4 蛋白的原核表達(dá)
    2.1 材料和方法
        2.1.1 病毒株、菌種、質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑和設(shè)備
        2.1.3 限制性內(nèi)切酶與引物
        2.1.4 RNA 提取
        2.1.5 蛋白原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.1.6 NSP4 蛋白的原核表達(dá)及 SDS-PAGE 檢測(cè)
        2.1.7 NSP4 蛋白的純化
        2.1.8 重組蛋白的 Western Blot 分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 NSP4 基因的擴(kuò)增
        2.2.2 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
        2.2.3 表達(dá)產(chǎn)物的 SDS-PAGE 分析
        2.2.4 蛋白的純化
        2.2.5 重組蛋白的 Western Blot 分析
    2.3 討論
第三章 輪狀病毒 NSP4 蛋白單克隆抗體的制備
    3.1 材料和方法
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 細(xì)胞及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.3 主要儀器及設(shè)備
        3.1.4 MAb 的制備
        3.1.5 MAb 特性及雜交瘤細(xì)胞的鑒定
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 間接 ELISA 檢測(cè)方法的建立
        3.2.2 雜交瘤細(xì)胞株的建立
        3.2.3 抗體效價(jià)測(cè)定及 MAb 亞類鑒定
        3.2.4 Western blot 鑒定
        3.2.5 間接免疫熒光鑒定
    3.3 討論
第四章 輪狀病毒 NSP4 蛋白抗原表位的鑒定
    4.1 材料和方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 多肽的設(shè)計(jì)
        4.1.3 抗原表位的鑒定
        4.1.4 抗原表位的保守性及同源性分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 蛋白表位預(yù)測(cè)及短肽設(shè)計(jì)序列
        4.2.2 ELISA 篩選抗原表位
        4.2.3 抗原表位同源性及保守性分析
    4.3 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3782909