豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的病毒性傳染病,主要表現(xiàn)為母豬嚴(yán)重的繁殖障礙及仔豬的呼吸系統(tǒng)疾病和生長(zhǎng)受阻。PRRSV為單股正鏈RNA病毒,自20世紀(jì)80年代末爆發(fā)以來(lái),PRRSV已經(jīng)嚴(yán)重威脅到了全球養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展,并且造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。自1995年我國(guó)報(bào)道發(fā)生該病以來(lái),該病己成為困擾我國(guó)養(yǎng)豬生產(chǎn)中最重要的病毒性傳染病之一。特別是2006年在我國(guó)出現(xiàn)的高致病性藍(lán)耳病,導(dǎo)致全國(guó)各地大批生豬死亡,給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。PRRSV感染豬可以引起強(qiáng)烈的間質(zhì)性肺炎,提示我們炎癥反應(yīng)在PRRSV感染和致病性方面扮演著十分重要的角色。然而,目前對(duì)這種毒株感染后引起宿主細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制知之甚少。針對(duì)這種新的PRRSV,本文開展了對(duì)其誘導(dǎo)宿主細(xì)胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的研究,為闡明PRRSV的致病機(jī)理以及其新型疫苗的研制提供理論依據(jù)。具體研究?jī)?nèi)容包括： 1.高致病性PRRSV感染激活I(lǐng)L-1β的分子機(jī)制及其生物學(xué)意義的研究 IL-1β是一種主要由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的促炎性細(xì)胞因子,是機(jī)體調(diào)節(jié)免疫和炎癥反應(yīng)的中心...

【文章頁(yè)數(shù)】：89 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表(Abbreviation)
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 炎癥反應(yīng)
        1.1.1 炎癥反應(yīng)機(jī)制
        1.1.2 炎癥小體
        1.1.3 NLRP3炎癥小體
        1.1.4 炎癥反應(yīng)的重要核心—1L-1β
        1.1.5 IL-6
        1.1.6 IL-8
        1.1.7 Toll樣受體與炎癥反應(yīng)
        1.1.8 TLR4與炎癥反應(yīng)
        1.1.9 RIG-Ⅰ樣受體與炎癥反應(yīng)
        1.1.10 ROS與炎癥反應(yīng)
        1.1.11 K⁺外流(K⁺ effflux)與炎癥反應(yīng)
    1.2 PRRSV與炎癥反應(yīng)
        1.2.1 PRRSV
        1.2.2 PRRSV誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)
        1.2.3 PRRSV編碼的蛋白誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)
        1.2.4 PRRSV誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的分子機(jī)制
第2章 研究目的與意義
第3章 材料與方法
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞、毒株與菌株
        3.1.2 工具酶及主要試劑
        3.1.3 Western Blot所需材料
        3.1.4 培養(yǎng)基與抗生素及其配制
        3.1.5 主要緩沖液與相關(guān)試劑及其配制
        3.1.6 主要實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
        3.1.7 分子生物學(xué)分析軟件
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 PRRSV的增殖
        3.2.2 病毒滴度的測(cè)定
        3.2.3 RNA的提取及RT-PCR擴(kuò)增目的片段
        3.2.4 siRNA轉(zhuǎn)染(脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法)
        3.2.5 Western Blot檢測(cè)目的蛋白在真核細(xì)胞中的表達(dá)
        3.2.6 SYBR Green Ⅰ實(shí)時(shí)定量PCR
        3.2.7 相對(duì)mRNA表達(dá)水平的計(jì)算
        3.2.8 ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子表達(dá)量
        3.2.9 雙熒光素酶檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
        3.2.10 PRRSV的間接免疫熒光(IFA)驗(yàn)證
        3.2.11 DAPI染色
        3.2.12 激光共聚焦顯微鏡觀察
        3.2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第4章 結(jié)果與分析
    4.1 高致病性PRRSV感染激活I(lǐng)L-1β的分子機(jī)制及其生物學(xué)意義研究
        4.1.1 PRRSV在PAM細(xì)胞中的感染動(dòng)力學(xué)分析
        4.1.2 PRRSV感染顯著激活I(lǐng)L-1β
        4.1.3 PRRSV感染激活I(lǐng)L-1β上游信號(hào)通路的研究
        4.1.4 NLRP3炎癥小體參與PRRSV感染誘導(dǎo)IL-1β的成熟與分泌
        4.1.5 ROS和K⁺外流參與PRRSV感染誘導(dǎo)IL-1β的成熟與分泌
        4.1.6 TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路參與PRRSV誘導(dǎo)NLRP3炎癥小體各元件的表達(dá)
        4.1.7 PRRSV誘導(dǎo)IL-1β的生物學(xué)意義
    4.2 PRRSV激活I(lǐng)L-6的分子機(jī)制研究
        4.2.1 PRRSV感染顯著激活I(lǐng)L-6
        4.2.2 PRRSV感染激活I(lǐng)L-6上游信號(hào)通路的研究
        4.2.3 NLRP3炎癥小體參與PRRSV感染誘導(dǎo)IL-6的成熟與分泌
        4.2.4 ROS和K⁺外流參與PRRSV感染誘導(dǎo)IL-6的分泌
        4.2.5 豬源IL-6蛋白不影響PRRSV在PAM細(xì)胞中的增殖
    4.3 PRRSV激活I(lǐng)L-8的分子機(jī)制研究
        4.3.1 PRRSV感染顯著激活I(lǐng)L-8
        4.3.2 PRRSV感染激活I(lǐng)L-8上游信號(hào)通路的研究
        4.3.3 NLRP3炎癥小體參與PRRSV感染誘導(dǎo)IL-8的成熟與分泌
        4.3.4 ROS和K⁺外流參與PRRSV感染誘導(dǎo)IL-8的分泌
        4.3.5 豬源IL-8蛋白不影響PRRSV在PAM細(xì)胞中的增殖
第5章 討論與結(jié)論
    5.1 討論
        5.1.1 PRRSV激活I(lǐng)L-1β的分子機(jī)制及其生物學(xué)意義研究
        5.1.2 PRRSV激活I(lǐng)L-6,IL-8的分子機(jī)制研究
    5.2 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄



本文編號(hào)：3776411