豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)的病毒性傳染病,主要表現(xiàn)為母豬嚴重的繁殖障礙及仔豬的呼吸系統(tǒng)疾病和生長受阻。PRRSV為單股正鏈RNA病毒,自20世紀80年代末爆發(fā)以來,PRRSV已經(jīng)嚴重威脅到了全球養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展,并且造成了巨大的經(jīng)濟損失。自1995年我國報道發(fā)生該病以來,該病己成為困擾我國養(yǎng)豬生產(chǎn)中最重要的病毒性傳染病之一。特別是2006年在我國出現(xiàn)的高致病性藍耳病,導致全國各地大批生豬死亡,給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。PRRSV感染豬可以引起強烈的間質性肺炎,提示我們炎癥反應在PRRSV感染和致病性方面扮演著十分重要的角色。然而,目前對這種毒株感染后引起宿主細胞的信號轉導機制知之甚少。針對這種新的PRRSV,本文開展了對其誘導宿主細胞產(chǎn)生炎癥反應信號轉導機制的研究,為闡明PRRSV的致病機理以及其新型疫苗的研制提供理論依據(jù)。具體研究內容包括： 1.高致病性PRRSV感染激活IL-1β的分子機制及其生物學意義的研究 IL-1β是一種主要由單核細胞、巨噬細胞和淋巴細胞產(chǎn)生的促炎性細胞因子,是機體調節(jié)免疫和炎癥反應的中心...

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表(Abbreviation)
第1章 文獻綜述
    1.1 炎癥反應
        1.1.1 炎癥反應機制
        1.1.2 炎癥小體
        1.1.3 NLRP3炎癥小體
        1.1.4 炎癥反應的重要核心—1L-1β
        1.1.5 IL-6
        1.1.6 IL-8
        1.1.7 Toll樣受體與炎癥反應
        1.1.8 TLR4與炎癥反應
        1.1.9 RIG-Ⅰ樣受體與炎癥反應
        1.1.10 ROS與炎癥反應
        1.1.11 K⁺外流(K⁺ effflux)與炎癥反應
    1.2 PRRSV與炎癥反應
        1.2.1 PRRSV
        1.2.2 PRRSV誘導的炎癥反應
        1.2.3 PRRSV編碼的蛋白誘導的炎癥反應
        1.2.4 PRRSV誘導炎癥反應的分子機制
第2章 研究目的與意義
第3章 材料與方法
    3.1 試驗材料
        3.1.1 細胞、毒株與菌株
        3.1.2 工具酶及主要試劑
        3.1.3 Western Blot所需材料
        3.1.4 培養(yǎng)基與抗生素及其配制
        3.1.5 主要緩沖液與相關試劑及其配制
        3.1.6 主要實驗儀器及設備
        3.1.7 分子生物學分析軟件
    3.2 試驗方法
        3.2.1 PRRSV的增殖
        3.2.2 病毒滴度的測定
        3.2.3 RNA的提取及RT-PCR擴增目的片段
        3.2.4 siRNA轉染(脂質體介導轉染法)
        3.2.5 Western Blot檢測目的蛋白在真核細胞中的表達
        3.2.6 SYBR Green Ⅰ實時定量PCR
        3.2.7 相對mRNA表達水平的計算
        3.2.8 ELISA檢測細胞因子表達量
        3.2.9 雙熒光素酶檢測實驗
        3.2.10 PRRSV的間接免疫熒光(IFA)驗證
        3.2.11 DAPI染色
        3.2.12 激光共聚焦顯微鏡觀察
        3.2.13 統(tǒng)計學方法
第4章 結果與分析
    4.1 高致病性PRRSV感染激活IL-1β的分子機制及其生物學意義研究
        4.1.1 PRRSV在PAM細胞中的感染動力學分析
        4.1.2 PRRSV感染顯著激活IL-1β
        4.1.3 PRRSV感染激活IL-1β上游信號通路的研究
        4.1.4 NLRP3炎癥小體參與PRRSV感染誘導IL-1β的成熟與分泌
        4.1.5 ROS和K⁺外流參與PRRSV感染誘導IL-1β的成熟與分泌
        4.1.6 TLR4/MyD88/NF-κB信號通路參與PRRSV誘導NLRP3炎癥小體各元件的表達
        4.1.7 PRRSV誘導IL-1β的生物學意義
    4.2 PRRSV激活IL-6的分子機制研究
        4.2.1 PRRSV感染顯著激活IL-6
        4.2.2 PRRSV感染激活IL-6上游信號通路的研究
        4.2.3 NLRP3炎癥小體參與PRRSV感染誘導IL-6的成熟與分泌
        4.2.4 ROS和K⁺外流參與PRRSV感染誘導IL-6的分泌
        4.2.5 豬源IL-6蛋白不影響PRRSV在PAM細胞中的增殖
    4.3 PRRSV激活IL-8的分子機制研究
        4.3.1 PRRSV感染顯著激活IL-8
        4.3.2 PRRSV感染激活IL-8上游信號通路的研究
        4.3.3 NLRP3炎癥小體參與PRRSV感染誘導IL-8的成熟與分泌
        4.3.4 ROS和K⁺外流參與PRRSV感染誘導IL-8的分泌
        4.3.5 豬源IL-8蛋白不影響PRRSV在PAM細胞中的增殖
第5章 討論與結論
    5.1 討論
        5.1.1 PRRSV激活IL-1β的分子機制及其生物學意義研究
        5.1.2 PRRSV激活IL-6,IL-8的分子機制研究
    5.2 結論
參考文獻
致謝
附錄



本文編號：3776411