旨在探索兔原始生殖細(xì)胞(primordial germ cells, PGCs)體外分離培養(yǎng)的最佳條件,從而建立成熟穩(wěn)定的兔PGCs體外分離培養(yǎng)方法。本研究首先通過兩種不同的體外分離法(胰酶消化法、機(jī)械法)和3種不同的傳代法(胰酶消化法、機(jī)械法、連同飼養(yǎng)層消化法)探索第14～18天胎兔的PGCs體外分離傳代的最佳方式,另將培養(yǎng)液分為A、B、C、D 4組,以D組為對照組,探究不同細(xì)胞因子濃度對兔PGCs形態(tài)變化及集落形成的影響。其次,利用堿性磷酸酶染色(alkaline phosphatase staining, AKP)法對兔PGCs進(jìn)行鑒定染色;實(shí)時(shí)熒光定量(real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)檢測轉(zhuǎn)錄因子Oct-4的表達(dá)。結(jié)果表明,機(jī)械法分離得到的兔PGCs集落數(shù)量是酶消化法分離的2.2倍,而兔PGCs經(jīng)不同的消化法傳代發(fā)現(xiàn),酶消化法、連同飼養(yǎng)層消化法、機(jī)械法在兔胚胎成纖維細(xì)胞(rabbit embryo fibroblast, REF)飼養(yǎng)層上分別成功傳至P2、P2、P4代。B組PGCs培養(yǎng)液(基礎(chǔ)液+10%胎牛血清(fetal...

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 主要試劑與儀器
    1.3 REF的分離培養(yǎng)與飼養(yǎng)層的制備
    1.4 酶消化法和機(jī)械法兩種不同分離方法對兔PGCs的影響
    1.5 不同傳代方法對兔PGCs的影響
    1.6 兔PGCs的鑒定
        1.6.1 形態(tài)學(xué)鑒定
        1.6.2 堿性磷酸酶(alkaline phosphatase staining, AKP)染色鑒定
        1.6.3 RT-PCR鑒定
    1.7 細(xì)胞因子對兔PGCs分離培養(yǎng)的影響
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié) 果
    2.1 REF的生物學(xué)特性
    2.2 兔PGCs生長行為觀察
    2.3 AKP染色鑒定兔PGCs
    2.4 RT-PCR檢測兔PGCs集落中轉(zhuǎn)錄因子Oct-4的表達(dá)
    2.5 胰酶消化法和機(jī)械法兩種不同分離方法對兔PGCs體外培養(yǎng)的影響
    2.6 不同傳代方法對兔PGCs體外培養(yǎng)的影響
    2.7 不同濃度細(xì)胞因子對兔PGCs體外培養(yǎng)的影響
3 討 論
4 結(jié) 論



本文編號：3770155