豬偽狂犬病(Pseudorabies, PR)是偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)引起的一種豬的重要傳染病,主要臨床癥狀包括：新生仔豬中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂、斷奶仔豬和育肥豬表現(xiàn)出呼吸道癥狀、妊娠母豬繁殖障礙,給世界生豬養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前,防控偽狂犬病主要依靠疫苗免疫,美國與部分歐洲國家已宣布通過基因缺失疫苗免疫和凈化技術(shù),根除了該病在家豬中的流行。近30年來,我國廣泛使用PRV基因缺失弱毒疫苗有效控制并逐步凈化。但是,2011年以來,我國許多免疫PRV活疫苗的豬場出現(xiàn)仔豬神經(jīng)癥狀及死亡,生長豬呼吸道癥狀并部分死亡,妊娠母豬流產(chǎn)、死胎、弱仔等疑似PR的臨床癥狀。本研究在病原學(xué)調(diào)查基礎(chǔ)上,從我國發(fā)病豬場分離獲得5株P(guān)RV,并以PRVZJ01毒株為研究對象,系統(tǒng)地研究其毒力、抗原特性和基因組特征,并成功構(gòu)建了ZJ01株的感染性細(xì)菌人工染色體克隆,獲得ZJ01 gE/gI基因缺失病毒,觀察其滅活疫苗免疫特性,為進(jìn)一步開展PRV變異毒株進(jìn)化機(jī)制和新型疫苗研究奠定基礎(chǔ)。本研究內(nèi)容分為以下5個部分：1.中國東南部豬偽狂犬病病毒超強(qiáng)毒株分離與鑒定偽狂犬病病毒是威脅養(yǎng)...

【文章頁數(shù)】：150 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
綜述部分
    第一章 偽狂犬病病毒分子病毒學(xué)及其免疫研究進(jìn)展
        1 病原
            1.1 病毒理化特性
            1.2 病毒分子生物學(xué)特征
            1.3 流行病學(xué)
            1.4 病毒致病性
        2 防制
            2.1 PRV免疫
            2.2 PRV疫苗
    參考文獻(xiàn)
研究部分
    第二章 我國豬偽狂犬病病毒超強(qiáng)毒株分離與鑒定
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 主要材料
            1.2 臨床病料與血清樣品
            1.3 病毒分離鑒定
            1.4 病毒滴度測定
            1.5 病毒粒子的電鏡觀察
            1.6 PRV gE與gC基因的PCR擴(kuò)增、克隆與基因測序
            1.7 基因遺傳進(jìn)化樹分析
            1.8 PRV gE與gC基因編碼氨基酸序列比對分析
            1.9 PRV ZJ01動物感染試驗
            1.10 PRV不同毒株毒力比較
            1.11 病理學(xué)觀察
            1.12 組織中PRV DNA載量的檢測
            1.13 PRV ELISA抗體檢測
            1.14 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果
            2.1 臨床觀察與血清學(xué)調(diào)查
            2.2 病毒分離與鑒定
            2.3 病毒粒子形態(tài)
            2.4 gE和gC基因序列分析
            2.5 PRV ZJ01株動物感染試驗結(jié)果
            2.6 毒力比較試驗結(jié)果
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
    第三章 豬偽狂犬病病毒超強(qiáng)毒株ZJ01抗原特性鑒定
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 病毒與細(xì)胞
            1.2 試劑
            1.3 病毒血清交叉中和試驗
            1.4 PRV ZJ01株滅活疫苗制備
            1.5 仔豬免疫保護(hù)試驗
            1.6 PRV ELISA抗體的檢測
            1.7 PRV中和抗體的檢測
            1.8 鼻腔排毒的檢測
            1.9 臟器組織中PRV病毒載量的檢測
            1.10 病理學(xué)觀察
            1.11 統(tǒng)計學(xué)分析
        2 結(jié)果
            2.1 清病毒交叉中和試驗
            2.2 豬體免疫試驗結(jié)果
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        abstract
    第四章 豬偽狂犬病病毒超強(qiáng)毒株ZJ01全基因組序列測定與分析
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 病毒
            1.2 試劑
            1.3 PRV ZJ01基因組DNA的提取與純化
            1.4 Ion Torrent高通量測序
            1.5 序列的拼接與組裝
            1.6 Gaps的填補(bǔ)
            1.7 PRV ZJ01全基因組序列PCR驗證
            1.8 PRV ZJ01基因組RFLP驗證
            1.9 PRV ZJ01基因注釋及功能預(yù)測GC含量的計算
            1.10 進(jìn)化樹分析
            1.11 PRV gE與gC基因編碼氨基酸序列比對分析
        2 結(jié)果與討論
            2.1 PRV ZJ01 gDNA提取與純化
            2.2 PRV ZJ01 基因組序列的測定
            2.3 PRV ZJ01 基因組的注釋
            2.4 PRV ZJ01 編碼蛋白的特點
            2.5 PRV ZJ01 基因組調(diào)控序列的分析
            2.6 基因序列進(jìn)化分析
        參考文獻(xiàn)
        abstract
    第五章 豬偽狂犬病病毒超強(qiáng)毒株ZJO1 BAC細(xì)菌人工染色體構(gòu)建與鑒定
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 病毒與細(xì)胞
            1.2 質(zhì)粒與菌株
            1.3 工具酶與試劑
            1.4 病毒純化與基因組提取
            1.5 引物設(shè)計與同源重組臂的PCR擴(kuò)增
            1.6 轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建
            1.7 重組病毒拯救與噬斑純化
            1.8 重組病毒vZJ01-GFP△gE/gI株BAC的克隆與鑒定
            1.9 pZJ01遺傳穩(wěn)定性
            1.10 gE/gI基因缺失病毒vZJ01△gE/gI的構(gòu)建與鑒定
            1.11 無痕恢復(fù)病毒vZJ01gE/gI-R的構(gòu)建與鑒定
            1.12 病毒體外增殖特征測定
            1.13 小鼠攻毒試驗
            1.14 家兔攻毒試驗
            1.15 仔豬攻毒試驗
            1.16 統(tǒng)計學(xué)分析
        2 結(jié)果
            2.1 中間載體構(gòu)建與鑒定
            2.2 轉(zhuǎn)移載體構(gòu)建與鑒定
            2.3 vZJ01-GFP△gE/gI重組病毒拯救與純化
            2.4 PRV ZJ01 BAC克隆的篩選與鑒定
            2.5 PRV ZJ01 BAC克隆的遺傳穩(wěn)定性鑒定
            2.6 gE/gI基因缺失病毒vZJ01△gE/gI的構(gòu)建與純化
            2.7 無痕恢復(fù)病毒vZJ01gE/gI-R的構(gòu)建與純化
            2.8 重組病毒空斑形態(tài)觀察
            2.9 病毒生長曲線
            2.10 小鼠攻毒試驗結(jié)果
            2.11 家兔攻毒試驗結(jié)果
            2.12 豬體攻毒試驗結(jié)果
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        abstract
    第六章 豬偽狂犬病病毒超強(qiáng)毒ZJ01 gE/gI基因缺失株滅活疫苗免疫保護(hù)作用
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 病毒與細(xì)胞
            1.2 試劑
            1.3 疫苗的準(zhǔn)備
            1.4 仔豬免疫保護(hù)試驗
            1.5 PRV ELISA抗體的檢測
            1.6 PRV中和抗體的檢測
            1.7 鼻腔排毒的檢測
            1.8 臟器組織中PRV病毒載量的檢測
            1.9 病理學(xué)觀察
            1.10 統(tǒng)計學(xué)分析
        2 結(jié)果
            2.1 疫苗安全性
            2.2 免疫抗體測定結(jié)果
            2.3 攻毒保護(hù)試驗結(jié)果
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        abstract
全文總結(jié)
致謝
發(fā)表論文



本文編號：3767580