豬嗜血支原體病即豬附紅細(xì)胞體病(Porcine Eperythrozoonosis, PE)是由豬嗜血支原體(Mycoplasma. suis, M. suis)寄生于紅細(xì)胞導(dǎo)致的一種熱性、急性、溶血性黃疸貧血人獸共患傳染病。慢性輕度感染的臨床表現(xiàn)多樣,從無癥狀感染到一系列臨床癥狀感染,新生仔豬表現(xiàn)為貧血、溫和性黃疸,育肥豬生長遲緩,青年母豬繁殖能力下降。由于急性貧血和慢性持續(xù)性感染能夠提高呼吸和消化系統(tǒng)疾病的易感性,該病對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。為了深入研究豬嗜血支原體致病機(jī)制,本研究建立了豬嗜血支原體實(shí)時(shí)熒光定量PCR,闡明了豬嗜血支原體血液中含量和血液動(dòng)力學(xué)之間的相關(guān)性。而且,通過感染豬體實(shí)驗(yàn)記錄了豬嗜血支原體病的臨床癥狀、血液學(xué)和生物化學(xué)指標(biāo)、菌血癥、抗體水平、細(xì)胞因子變化以及組織病理學(xué)等各個(gè)方面變化,同時(shí)建立了小鼠6種細(xì)胞因子的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法和進(jìn)行了小鼠的初步感染試驗(yàn)。具體研究內(nèi)容和結(jié)果分為以下3個(gè)部分： 1.豬嗜血支原體熒光定量PCR檢測方法的建立 根據(jù)GenBank發(fā)表的豬嗜血支原體16S rRNA基因序列設(shè)計(jì)合成熒光定量PCR引物,用構(gòu)建的含16S rRNA...

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 豬嗜血支原體病研究進(jìn)展
        1 豬嗜血支原體病研究概況
        2 豬嗜血支原體的病原學(xué)
            2.1 形態(tài)
            2.2 分類
            2.3 分子病原學(xué)
        3 豬嗜血支原體病流行病學(xué)
            3.1 流行概況
            3.2 傳播途徑
            3.3 感染宿主
        4 豬嗜血支原體病的臨床癥狀及病理變化
        5 豬嗜血支原體病的血液學(xué)研究
        6 豬嗜血支原體病的致病機(jī)理
        7 豬嗜血支原體病的診斷
            7.1 豬嗜血支原體病的臨床診斷
            7.2 豬嗜血支原體病的實(shí)驗(yàn)室診斷
        8 豬嗜血支原體的防治
        9 豬嗜血支原體病動(dòng)物模型研究
    參考文獻(xiàn)
第二篇 試驗(yàn)研究
    第二章 豬嗜血支原體熒光定量PCR檢測方法的建立
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 菌種
            1.2 試劑和菌株
            1.3 引物
            1.4 提取豬嗜血支原體DNA
            1.5 熒光定量PCR擴(kuò)增
            1.6 目的片段的回收和克隆
            1.7 重組質(zhì)粒的提取
            1.8 重組質(zhì)粒的酶切鑒定及測序分析
            1.9 熒光定量PCR條件優(yōu)化
            1.10 熔解曲線分析
            1.11 熒光定量PCR的敏感性和標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            1.12 實(shí)時(shí)熒光定量PCR重復(fù)性
            1.13 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果
            2.1 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)陽性質(zhì)粒
            2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR體系的優(yōu)化
            2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的特異性
            2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的敏感性和標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的重復(fù)性試驗(yàn)
        3 討論
        ABSTRACT
        參考文獻(xiàn)
    第三章 豬嗜血支原體豬體感染試驗(yàn)
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 試劑、菌株和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 動(dòng)物試驗(yàn)及分組
            1.3 菌血癥
            1.4 液學(xué)和生物化學(xué)指標(biāo)變化
            1.5 抗體和細(xì)胞因子
            1.6 病理剖檢和組織病理學(xué)檢查
            1.7 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果
            2.1 臨床表現(xiàn)
            2.2 體溫
            2.3 體重
            2.4 菌血癥檢測
            2.5 液學(xué)和生物化學(xué)指標(biāo)檢測
            2.6 豬嗜血支原體血液中含量和血液動(dòng)力學(xué)參數(shù)的相關(guān)性
            2.7 抗體和細(xì)胞因子檢測結(jié)果
            2.8 組織病理學(xué)變化
        3 討論
        ABSTRACT
        參考文獻(xiàn)
    第四章 小鼠細(xì)胞因子熒光定量PCR檢測方法的建立
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 試劑和菌株以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 細(xì)胞因子引物的設(shè)計(jì)
            1.3 RNA的提取和cDNA的合成
            1.4 脾臟淋巴細(xì)胞的分離
            1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            1.6 目的片段的擴(kuò)增
            1.7 重組質(zhì)粒提取
            1.8 酶切鑒定重組質(zhì)粒及測序分析
            1.9 熔解曲線分析
            1.10 實(shí)時(shí)熒光定量PCR敏感性和標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            1.11 實(shí)時(shí)熒光定量PCR重復(fù)性
            1.12 小鼠攻毒試驗(yàn)
            1.13 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果
            2.1 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)陽性質(zhì)粒
            2.2 特異性
            2.3 敏感性和標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的重復(fù)性試驗(yàn)
            2.5 小鼠感染試驗(yàn)
        3 討論
        ABSTRACT
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
致謝



本文編號(hào)：3759915