發(fā)布時(shí)間：2023-03-11 04:26

　　硒是動(dòng)物體內(nèi)必需的微量元素之一,它具有許多生物學(xué)功能,如抗癌作用、解毒作用、抗氧化作用、調(diào)控甲狀腺的代謝作用、增強(qiáng)機(jī)體免疫作用和防止疾病等作用,這些功能都與機(jī)體正常生命活動(dòng)密切相關(guān),這使得硒的生物學(xué)功能機(jī)制受到世界范圍內(nèi)的廣泛重視,與其發(fā)揮生物學(xué)功能的硒蛋白也成為近年來世界研究的熱點(diǎn)。 缺硒病是一種常見的營養(yǎng)代謝病,缺硒病表現(xiàn)出肌肉組織、胰腺等的變性壞死和滲出性素質(zhì)等病理變化。目前,缺硒能引起胰腺、消化道等組織學(xué)損傷的研究報(bào)道較多,但缺硒在雞腎臟、甲狀腺組織損傷的報(bào)道很少。 本試驗(yàn)復(fù)制雞缺硒病模型,通過缺硒對雞腎臟組織炎癥基因HO-1和iNOS mRNA和蛋白表達(dá)、對雞甲狀腺組織中25種硒蛋白mRNA表達(dá)和甲狀腺激素含量的變化水平以及對雞腎臟和甲狀腺組織抗氧化功能的檢測來探討缺硒對腎臟、甲狀腺組織損傷的機(jī)制。研究結(jié)果表明： 1.在試驗(yàn)期內(nèi),試驗(yàn)組雞出現(xiàn)腹瀉、滲出性素質(zhì)等癥狀,上述結(jié)果表明,缺硒可導(dǎo)致雞組織結(jié)構(gòu)發(fā)生損傷,病例模型復(fù)制成功。 2.利用原核表達(dá)載體表達(dá)HO-1和iNOS融合蛋白免疫兔子,成功制備兔抗雞HO-1和iNOS多克隆抗體。 3.缺硒導(dǎo)致雞腎臟組織中炎癥基因HO-1和i...

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 硒在機(jī)體內(nèi)的代謝
    1.2 硒蛋白的種類與功能
        1.2.1 抗氧化硒蛋白
        1.2.2 脫碘酶家族硒蛋白
        1.2.3 鈣調(diào)節(jié)硒蛋白
    1.3 硒對甲狀腺功能的影響
    1.4 硒對腎臟的影響
    1.5 炎癥基因的研究進(jìn)展
    1.6 目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)的總體設(shè)計(jì)
    2.2 樣品的采集與處理
    2.3 主要儀器和試劑
        2.3.1 主要儀器
        2.3.2 主要試劑
    2.4 雞HO-1和iNOS基因的克隆、原核表達(dá)、多克隆抗體的制備
        2.4.1 雞HO-1和iNOS基因序列的克隆與鑒定
        2.4.2 雞HO-1和iNOS基因在大腸桿菌中的表達(dá)、純化和鑒定
        2.4.3 抗雞HO-1和iNOS多克隆抗體的制備
    2.5 檢測項(xiàng)目與方法
        2.5.1 甲狀腺激素檢測
        2.5.2 組織抗氧化功能檢測
        2.5.3 腎功能指標(biāo)檢測
        2.5.4 腎臟HO-1和iNOS蛋白表達(dá)的檢測
        2.5.5 引物的設(shè)計(jì)與合成
        2.5.6 實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增
        2.5.7 2^-△△Ct法分析基因表達(dá)的相對差異
    2.6 試驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析與統(tǒng)計(jì)
3 結(jié)果與分析
    3.1 雞HO-1和iNOS多克隆抗體制備
        3.1.1 組織中總RNA的提取與鑒定
        3.1.2 雞HO-1和iNOS基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果
        3.1.3 雞HO-1和iNOS mRNA基因序列的測序結(jié)果
        3.1.4 重組表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
        3.1.5 融合蛋白的表達(dá)、鑒定與純化
        3.1.6 多克隆抗體的制備和鑒定結(jié)果
    3.2 雞抗氧化功能的檢測結(jié)果
        3.2.1 雞腎臟組織抗氧化功能的檢測結(jié)果
        3.2.2 雞甲狀腺組織抗氧化功能的檢測結(jié)果
    3.3 雞腎臟功能指標(biāo)的檢測結(jié)果
    3.4 雞腎臟HO-1和iNOS mRNA和蛋白表達(dá)的檢測結(jié)果
        3.4.1 實(shí)時(shí)PCR檢測方法的建立
        3.4.2 缺硒對雞腎臟HO-1和iNOS mRNA表達(dá)影響的檢測結(jié)果
    3.5 缺硒對雞腎臟HO-1和iNOS蛋白表達(dá)影響的檢測結(jié)果
    3.6 缺硒對雞甲狀腺功能影響的檢測結(jié)果
        3.6.1 血清中T₃、T₄、FT₃、FT₄和TSH檢測結(jié)果
        3.6.2 缺硒對雞甲狀腺25種硒蛋白mRNA的檢測結(jié)果
4 討論
    4.1 雞HO-1和iNOS的克隆、表達(dá)及多克隆抗體的制備
    4.2 缺硒對雞腎臟的影響
        4.2.1 缺硒對雞腎臟HO-1表達(dá)的影響
        4.2.2 缺硒對雞腎臟iNOS表達(dá)的影響
        4.2.3 缺硒對雞腎臟抗氧化功能的影響
        4.2.4 缺硒對腎功能指標(biāo)檢測的影響
    4.3 缺硒對雞甲狀腺組織內(nèi)25種硒蛋白表達(dá)的影響
    4.4 缺硒對雞甲狀腺激素的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3759194