發(fā)布時(shí)間：2023-03-11 04:34

　　腸道菌群種類(lèi)和數(shù)量可以影響宿主脂肪沉積,而硬壁菌門(mén)(Firmicutes)和擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes)是哺乳動(dòng)物腸道中的優(yōu)勢(shì)菌群。前人的研究主要集中在糞便或食糜中菌群,反映大腸腸腔內(nèi)菌群,不能反映小腸內(nèi)及腸粘膜菌群。小腸內(nèi)菌群與大腸明顯不同,腸粘膜菌群與腸腔菌群明顯不同。本研究在考察不同沉脂能力豬脂肪沉積和回腸內(nèi)容物、回腸粘膜菌群差異的基礎(chǔ)上,研究回腸粘膜菌群與脂肪沉積的關(guān)系和G-細(xì)菌細(xì)胞壁成分LPS及其受體TLR4與腸道粘膜菌群的關(guān)系,在此基礎(chǔ)上考察不同微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)豬回腸粘膜菌群、脂肪沉積、血液生化指標(biāo)、炎性因子基因和脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響,初步探討腸粘膜菌群影響脂肪沉積的作用途徑。研究包括以下四個(gè)試驗(yàn)： 試驗(yàn)一豬回腸粘膜和食糜菌群與脂肪沉積的關(guān)系 為研究腸粘膜上菌群與脂肪沉積的關(guān)系,本試驗(yàn)考察不同沉脂能力豬回腸粘膜和回腸食糜菌群差異和脂肪沉積差異。選取日齡接近,體重20kg左右杜洛克x梅山豬(DM)和杜長(zhǎng)大豬(DLY)各6頭,單籠飼養(yǎng),飼喂同一玉米-豆粕日糧,試豬達(dá)110kg時(shí)全部屠宰,測(cè)定背膘厚度、眼肌面積、板油重和肌內(nèi)脂肪含量,并采集回腸粘膜樣品,采用根據(jù)細(xì)菌...

【文章頁(yè)數(shù)】：121 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1 腸道微生物
        1.1 腸道微生物與脂肪沉積的關(guān)系
        1.2 腸粘膜菌群
    2 腸道菌群影響脂肪沉積的可能途徑
        2.1 SCFAs(short chain fatty acids)
        2.2 腸道細(xì)菌引起的炎癥
    3 日糧對(duì)擬桿菌、硬壁菌的影響
        3.1 碳水化合物、脂肪、蛋白質(zhì)水平
        3.2 硫酸粘桿菌素
            3.2.1 粘桿菌素對(duì)微生物的影響
            3.2.2 粘桿菌素對(duì)生產(chǎn)性能、脂肪代謝的影響
        3.3 銀耳孢子發(fā)酵物
            3.3.1 銀耳孢子發(fā)酵物的制備和組成
            3.3.2 銀耳多糖/銀耳孢子發(fā)酵物對(duì)動(dòng)物腸道微生物的影響
            3.3.3 銀耳多糖/銀耳孢子發(fā)酵物對(duì)動(dòng)物脂肪代謝的影響
        3.4 益生菌
            3.4.1 益生菌對(duì)脂肪沉積的影響
            3.4.2 益生菌對(duì)腸道菌群的影響
第二部分 目前存在的問(wèn)題及本研究的目的、意義和內(nèi)容
    1 存在問(wèn)題
    2 本研究的目的和意義
    3 研究?jī)?nèi)容
    4 研究路線(xiàn)
第三部分 試驗(yàn)研究
    試驗(yàn)一 豬回腸粘膜和食糜菌群與脂肪沉積的關(guān)系
        1 前言
        2 材料與方法
            2.1 試驗(yàn)動(dòng)物及日糧
            2.2 飼養(yǎng)管理
            2.3 樣品采集
                2.3.1 食糜
                2.3.2 回腸粘膜
                2.3.3 肌肉
            2.4 測(cè)定指標(biāo)及方法
            2.5 擬桿菌、硬壁菌測(cè)定
                2.5.1 細(xì)菌菌株
                2.5.2 細(xì)菌菌株的培養(yǎng)及DNA提取
                2.5.3 引物
                2.5.4 標(biāo)準(zhǔn)品的制備及鑒定
                    2.5.4.1 目的片段的擴(kuò)增
                    2.5.4.2 PCR產(chǎn)物的回收
                    2.5.4.3 PCR產(chǎn)物的T載體連接
                    2.5.4.4 轉(zhuǎn)化
                    2.5.4.5 篩選重組子
                    2.5.4.6 質(zhì)粒的提取
                    2.5.4.7 質(zhì)粒DNA的測(cè)序
                2.5.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立
                2.5.6 硬壁菌門(mén)、擬桿菌門(mén)和總細(xì)菌的檢測(cè)
                    2.5.6.1 細(xì)菌DNA提取
                    2.5.6.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)
            2.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析
        3 結(jié)果
            3.1 生產(chǎn)性能
            3.2 胴體指標(biāo)
            3.3 細(xì)菌DNA的提取
            3.4 DM豬和DLY豬腸粘膜擬桿菌和硬壁菌拷貝數(shù)
                3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
                3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
                3.4.3 硬壁門(mén)菌、擬桿菌和總細(xì)菌擴(kuò)增曲線(xiàn)和溶解曲線(xiàn)
                3.4.4 DM豬和DLY豬回腸粘膜和內(nèi)容物各類(lèi)細(xì)菌拷貝數(shù)和比值
                3.4.5 腸道菌群和背膘厚相關(guān)性分析
        4 討論
            4.1 生產(chǎn)性能和胴體指標(biāo)
            4.2 腸道菌群
            4.3 腸道菌群與脂肪沉積的關(guān)系
        5 小結(jié)
    試驗(yàn)二 豬回腸粘膜微生物與血漿LPS水平、TLR4、TLR5基因的關(guān)系
        1 前言
        2 材料方法
            2.1 試驗(yàn)材料
            2.2 腸道擬桿菌、硬壁菌數(shù)量檢測(cè)
            2.3 TLR4、TLR5 mRNA相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)
                2.3.1 總RNA的提取
                2.3.2 檢測(cè)RNA的完整性
                2.3.3 各組織總RNA濃度的測(cè)定
                2.3.4 反轉(zhuǎn)錄
                2.3.5 引物設(shè)計(jì)與合成
                2.3.6 定量檢測(cè)基因的表達(dá)
            2.4 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析
        3 結(jié)果
            3.1 DM和DLY豬回腸粘膜和皮下脂肪TLR4、TLR5相對(duì)表達(dá)量差異
                3.1.1 RNA質(zhì)量檢測(cè)
                3.1.2 RT-PCR檢測(cè)目標(biāo)基因和內(nèi)參基因
                3.1.3 DM和DLY豬回腸粘膜和皮下脂肪TLR4、TLR5相對(duì)表達(dá)量差異
            3.2 回腸粘膜和皮下脂肪TLR4相對(duì)表達(dá)量與硬壁菌/擬桿菌比值的相關(guān)關(guān)系
            3.3 血漿LPS水平與腸道硬壁菌/擬桿菌比值的相關(guān)關(guān)系
        4 討論
        5 小結(jié)
    試驗(yàn)三 微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)豬生產(chǎn)性能、胴體品質(zhì)和回腸粘膜菌群的影響
        1 前言
        2 材料與方法
            2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.2 試驗(yàn)日糧
            2.3 飼養(yǎng)管理
            2.4 樣品采集
            2.5 測(cè)定指標(biāo)及方法
                2.5.1 生產(chǎn)性能指標(biāo)
                2.5.2 胴體指標(biāo)
                2.5.3 肌內(nèi)脂肪含量測(cè)定
                2.5.4 回腸粘膜和食糜中擬桿菌、硬壁菌和總細(xì)菌數(shù)量檢測(cè)
            2.6 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析
        3 結(jié)果
            3.1 生產(chǎn)性能
            3.2 胴體指標(biāo)和肌內(nèi)脂肪
            3.3 微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)回腸粘膜菌群數(shù)最及比例的影響
                3.3.1 細(xì)菌實(shí)時(shí)熒光定最PCR擴(kuò)增曲線(xiàn)和溶解曲線(xiàn)
                3.3.2 微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)回腸粘膜硬壁菌和擬桿菌數(shù)量和比例的影響
                3.3.3 腸道菌群和背膘厚度相關(guān)性分析
        4 討論
            4.1 微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)DLY豬生產(chǎn)性能的影響
            4.2 微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)DM豬和DLY豬脂肪沉積的影響
            4.3 微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)回腸粘膜菌群數(shù)量及比例的影響
            4.4 腸道微生態(tài)調(diào)節(jié)劑作用下脂肪沉積與腸道粘膜菌群的關(guān)系
        5 小結(jié)
    試驗(yàn)四 微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)豬血清指標(biāo)、炎癥因子和脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)量的影響
        1 前言
        2 材料與方法
            2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.2 試驗(yàn)日糧
            2.3 飼養(yǎng)管理
            2.4 樣品采集
                2.4.1 血清、血漿
                2.4.2 肌肉、脂肪、肝臟
                2.4.3 回腸粘膜
            2.5 測(cè)定指標(biāo)
                2.5.1 血液指標(biāo)
                    2.5.1.1 血漿脂多糖
                    2.5.1.2 血液脂質(zhì)代謝指標(biāo)
                    2.5.1.3 血清激素
                2.5.2 脂肪、肝臟和回腸粘膜mRNA相對(duì)表達(dá)量測(cè)定
                    2.5.2.1 總RNA提取
                    2.5.2.2 檢測(cè)RNA完整性
                    2.5.2.3 RNA反轉(zhuǎn)錄
                    2.5.2.4 引物設(shè)計(jì)與合成
                    2.5.2.5 RT-PCR檢測(cè)基因表達(dá)量
        3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析
        4 結(jié)果
            4.1 血漿脂多糖
            4.2 血清葡萄糖和激素
            4.3 血液脂質(zhì)代謝指標(biāo)
            4.4 微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)基因表達(dá)量的影響
                4.4.1 總RNA質(zhì)量鑒定
                4.4.2 RT-PCR檢測(cè)目標(biāo)基因和內(nèi)參基因
                4.4.3 基因PCR擴(kuò)增曲線(xiàn)和溶解曲線(xiàn)
                4.4.4 炎性細(xì)胞因子和TLR4基因相對(duì)表達(dá)量
                4.4.5 脂肪代謝相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量
                    4.4.5.1 肝臟
                    4.4.5.2 皮下脂肪
        5 討論
            5.1 微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)血漿脂多糖水平的影響
            5.2 微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)血清葡萄糖和激素的影響
            5.3 微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)血液脂質(zhì)代謝指標(biāo)的影響
            5.4 微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)基因表達(dá)量的影響
                5.4.1 炎性細(xì)胞因子和TLR4基因相對(duì)表達(dá)量
                5.4.2 脂肪代謝相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量
        6 小結(jié)
第四部分 本研究的總體討論與結(jié)論
    1 總體討論
        1.1 回腸食糜和粘膜硬壁菌和擬桿菌數(shù)量及比例
        1.2 腸粘膜菌群與脂肪沉積相關(guān)性
        1.3 腸粘膜和脂肪組織中TLR4基因和血漿LPS水平與腸道菌群的關(guān)系
        1.4 微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)回腸菌群、脂肪沉積、代謝的影響
    2 結(jié)論
    3 創(chuàng)新點(diǎn)
    4 有待進(jìn)一步研究的問(wèn)題
參考文獻(xiàn)
致謝
讀博士期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3759207