豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS,俗稱豬藍耳病)是嚴重危害全世界生豬養(yǎng)殖產業(yè)的疫病。多年來PRRSV在我國長期且大范圍流行并且已經造成極為嚴重的經濟損失。本研究的目的就是利用抗PRRSV M蛋白的單克隆抗體、通過捕獲PRRSV抗原來確立一種ELISA檢測技術,主要用于PRRS的診斷和監(jiān)測,同時對該單克隆抗體進行純化和輕鏈重鏈編碼序列測定并與Pub Med上已公布的小鼠抗體編碼基因進行比對。結果主要包括以下幾方面:1、通過對純化后單抗亞型鑒定,該單抗亞型為IgG2b,而后用Protein G Resin層析柱來純化Ig G。純化后的PRRSV Anti-M-Mab凝膠電泳圖中條帶清楚且無雜帶,說明純化后的Anti-M-Mab純度較高,雜蛋白較少。另外,對雜交瘤細胞進行基因組測序,結果驗證該單克隆抗體為胚系基因所編碼,序列比對顯示其整體編碼序列與胚系可變區(qū)基因的同源性高達99%,無體細胞突變和親和力成熟的過程。2、將SD16,GD-HD,JXA1,VR2332,VR2385,CH1a,NADC30L-Lik分別接種于易感細胞Mac145,通過IFA用雜交瘤上清檢測上述毒株,結果可知上述7種毒株...

【文章頁數】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要 abstract 第一章 豬繁殖與呼吸綜合征研究進展
1.1 豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)
    1.1.1 豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分類
    1.1.2 PRRSV病毒的分子生物學特性
1.2 豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)及其流行病學調查
1.3 PRRSV的流行病學調查
    1.3.1 國外PRRSV流行病學調查及分子生物學特征
    1.3.2 國內PRRSV流行病學現狀及毒株的分子生物學特征
1.4 PRRSV抗體及病原診斷方法研究進展
    1.4.1 PRRSV的血清學診斷
    1.4.2 PRRSV的病原診斷
    1.4.3 比較與討論 第二章 ANTI-M-MAB單克隆抗體的純化與鑒定
2.1 材料
    2.1.1 雜交瘤細胞
    2.1.2 主要儀器
    2.1.3 主要試劑
    2.1.4 主要試劑的配制
2.2 實驗方法
    2.2.1 雜交瘤細胞培養(yǎng)上清的純化
    2.2.2 單克隆抗體Anti-M-Mab的亞型鑒定
    2.2.3 雜交瘤細胞中RNA的提取及測序
2.3 結果
    2.3.1 單克隆抗體亞型鑒定
    2.3.2 SDS-PAGE檢測純化后的抗體的純度
    2.3.3 純化抗體的濃度測定
    2.3.4 RNA提取及測序結果
2.4 討論 第三章 ANTI-M-MAB單克隆抗體對不同PRRSV毒株的反應性檢測
3.1 材料
    3.1.1 病毒與細胞
    3.1.2 主要設備和儀器
    3.1.3 主要試劑
    3.1.4 主要試劑的配制
3.2 實驗方法
    3.2.1 Mac145細胞的培養(yǎng)
    3.2.2 PRRSV增殖與病毒滴度測定
    3.2.3 用間接免疫熒光(IFA)的方法檢測Anti-M-Mab與不同毒株的反應性
    3.2.4 用間接ELISA的方法檢測Anti-M-Mab識別的抗原表位的性質
3.3 結果
    3.3.1 M與PRRSV不同毒株的反應結果
    3.3.2 Anti-M-Mab所識別的表位性質
3.4 討論 第四章 雙抗夾心ELISA檢測方法的建立與優(yōu)化
4.1 材料
    4.1.1 主要設備與儀器
    4.1.2 主要試劑
    4.1.3 主要試劑與配置
4.2 實驗方法
4.3 結果
    4.3.1 雙抗夾心ELISA條件摸索
    4.3.2 雙抗夾心ELISA檢測PRRSV不同毒株
    4.3.3 最低檢出量的確定
4.4 討論 參考文獻 附錄 縮略詞 致謝 作者簡介



本文編號：3758497