奶牛乳腺上皮細(xì)胞(bovine mammary epithelial cells,bMECs)是乳腺實(shí)質(zhì)的主要細(xì)胞,除泌乳外,它還是乳腺免疫的效應(yīng)細(xì)胞,在受到外界刺激時(shí)能產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。bMECs已被證實(shí)在受到脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激后能通過Toll樣受體與NOD樣受體激活NF-κB等信號(hào)通路,調(diào)控炎癥介質(zhì),但在代謝物水平上的變化尚未有研究。代謝組學(xué)能對(duì)所有代謝物進(jìn)行定性與定量分析,找尋代謝物與生理病理變化的關(guān)系,提供全面的生物信息。因此,為了揭示LPS刺激bMECs所影響的代謝通路,并為進(jìn)一步篩選診斷與治療奶牛乳腺炎癥的生物標(biāo)志物提供科學(xué)依據(jù),進(jìn)行了如下研究:1.試驗(yàn)分別采用組織塊貼壁法與酶消化法進(jìn)行bMECs的體外分離培養(yǎng),對(duì)細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察后,分別用角蛋白18抗體與波形蛋白抗體進(jìn)行免疫熒光染色,并檢測(cè)細(xì)胞β-酪蛋白基因mRNA的表達(dá)。結(jié)果顯示,兩種方法均能成功培養(yǎng)出奶牛乳腺上皮細(xì)胞。酶消化法得到細(xì)胞所用時(shí)間更短,但組織損傷較大,兩種細(xì)胞混雜增加了純化難度。而組織塊貼壁法雖用時(shí)更長(zhǎng),但能得到數(shù)量更多且較純的乳腺上皮細(xì)胞。鑒定結(jié)果顯示,細(xì)胞呈角蛋...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 乳腺的防御機(jī)制
        1.1 乳腺的固有免疫與免疫細(xì)胞
        1.2 乳腺上皮細(xì)胞的免疫防御功能
    2 炎癥反應(yīng)
        2.1 炎性介質(zhì)
        2.2 炎癥反應(yīng)中的環(huán)氧合酶與脂氧合酶
        2.3 脂多糖誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞的炎癥模型
    3 代謝組學(xué)
        3.1 代謝組學(xué)研究技術(shù)
        3.2 代謝組學(xué)在醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用
    4 本研究目的與意義
第二章 奶牛乳腺上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 試驗(yàn)方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 奶牛乳腺上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)
        2.2 奶牛乳腺上皮細(xì)胞的純化與傳代
        2.3 奶牛乳腺上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定
        2.4 奶牛乳腺上皮細(xì)胞的β-酪蛋白基因檢測(cè)
        2.5 奶牛乳腺上皮細(xì)胞的熒光染色鑒定
    3 討論
    4 小結(jié)
第三章 LPS對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞炎性介質(zhì)與酶表達(dá)的影響
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 試驗(yàn)方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 引物特異性分析
        2.2 LPS對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞細(xì)胞因子和酶的mRNA表達(dá)的影響
        2.3 LPS對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞TNF-α、IL-6和PGE2分泌的影響
    3 討論
    4 小結(jié)
第四章 奶牛乳腺上皮細(xì)胞炎癥模型的代謝組學(xué)研究
    1 試驗(yàn)材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 試驗(yàn)方法
        1.3 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果與分析
        2.1 系統(tǒng)穩(wěn)定性的分析評(píng)價(jià)
        2.2 偏最小二乘判別分析(PLS-DA)
        2.3 正交偏最小二乘判別分析(OPLS-DA)
        2.4 單變量統(tǒng)計(jì)分析
        2.5 顯著性差異代謝物的篩選
        2.6 差異代謝物聚類分析
        2.7 差異代謝物KEGG通路分析
    3 討論
        3.1 對(duì)脂質(zhì)代謝通路的影響
        3.2 對(duì)抗氧化途徑的影響
        3.3 對(duì)其他代謝物的影響
    4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3757177