發(fā)布時間：2023-03-06 18:41

　　奶牛乳腺上皮細胞(bovine mammary epithelial cells,bMECs)是乳腺實質(zhì)的主要細胞,除泌乳外,它還是乳腺免疫的效應(yīng)細胞,在受到外界刺激時能產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。bMECs已被證實在受到脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激后能通過Toll樣受體與NOD樣受體激活NF-κB等信號通路,調(diào)控炎癥介質(zhì),但在代謝物水平上的變化尚未有研究。代謝組學能對所有代謝物進行定性與定量分析,找尋代謝物與生理病理變化的關(guān)系,提供全面的生物信息。因此,為了揭示LPS刺激bMECs所影響的代謝通路,并為進一步篩選診斷與治療奶牛乳腺炎癥的生物標志物提供科學依據(jù),進行了如下研究:1.試驗分別采用組織塊貼壁法與酶消化法進行bMECs的體外分離培養(yǎng),對細胞進行形態(tài)學觀察后,分別用角蛋白18抗體與波形蛋白抗體進行免疫熒光染色,并檢測細胞β-酪蛋白基因mRNA的表達。結(jié)果顯示,兩種方法均能成功培養(yǎng)出奶牛乳腺上皮細胞。酶消化法得到細胞所用時間更短,但組織損傷較大,兩種細胞混雜增加了純化難度。而組織塊貼壁法雖用時更長,但能得到數(shù)量更多且較純的乳腺上皮細胞。鑒定結(jié)果顯示,細胞呈角蛋...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻綜述
    1 乳腺的防御機制
        1.1 乳腺的固有免疫與免疫細胞
        1.2 乳腺上皮細胞的免疫防御功能
    2 炎癥反應(yīng)
        2.1 炎性介質(zhì)
        2.2 炎癥反應(yīng)中的環(huán)氧合酶與脂氧合酶
        2.3 脂多糖誘導乳腺上皮細胞的炎癥模型
    3 代謝組學
        3.1 代謝組學研究技術(shù)
        3.2 代謝組學在醫(yī)學研究中的應(yīng)用
    4 本研究目的與意義
第二章 奶牛乳腺上皮細胞的分離培養(yǎng)與鑒定
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 奶牛乳腺上皮細胞的原代培養(yǎng)
        2.2 奶牛乳腺上皮細胞的純化與傳代
        2.3 奶牛乳腺上皮細胞形態(tài)學鑒定
        2.4 奶牛乳腺上皮細胞的β-酪蛋白基因檢測
        2.5 奶牛乳腺上皮細胞的熒光染色鑒定
    3 討論
    4 小結(jié)
第三章 LPS對奶牛乳腺上皮細胞炎性介質(zhì)與酶表達的影響
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 引物特異性分析
        2.2 LPS對奶牛乳腺上皮細胞細胞因子和酶的mRNA表達的影響
        2.3 LPS對奶牛乳腺上皮細胞TNF-α、IL-6和PGE2分泌的影響
    3 討論
    4 小結(jié)
第四章 奶牛乳腺上皮細胞炎癥模型的代謝組學研究
    1 試驗材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
        1.3 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果與分析
        2.1 系統(tǒng)穩(wěn)定性的分析評價
        2.2 偏最小二乘判別分析(PLS-DA)
        2.3 正交偏最小二乘判別分析(OPLS-DA)
        2.4 單變量統(tǒng)計分析
        2.5 顯著性差異代謝物的篩選
        2.6 差異代謝物聚類分析
        2.7 差異代謝物KEGG通路分析
    3 討論
        3.1 對脂質(zhì)代謝通路的影響
        3.2 對抗氧化途徑的影響
        3.3 對其他代謝物的影響
    4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3757177