人乳鐵蛋白(hLF)是一種具有廣泛的生物學活性的鐵結合糖蛋白。hLF基于其獨特的生物學功能和理化性質,已廣泛應用于食品、醫(yī)療、飼料添加劑等領域。然而,由于hLF來源的匱乏及加工過程造成的污染,使得其大規(guī)模的應用受到了限制。而乳腺生物反應器相對于傳統(tǒng)的蛋白質表達系統(tǒng),具有以較低的成本生產大量的活性蛋白的潛能。因此,利用基因工程技術開發(fā)重組人乳鐵蛋白(rhLF)成為研究的熱點和發(fā)展趨勢。 在前期的研究工作中,本實驗室構建了含有人乳鐵蛋白cDNA的rhLF乳腺特異性表達載體,獲得了乳腺特異性表達rhLF的轉基因奶山羊。本研究選用了其中兩只rhLF轉基因奶山羊(L6-4、L3-1)的羊乳汁,經(jīng)過分離純化,鑒定其是否與hLF具有相一致的生物學活性。 分別收集轉基因奶山羊L6-4、L3-1羊乳汁,離心去除脂肪,酸化沉淀去除酪蛋白,獲得乳清。將乳清利用三次硫酸銨沉淀法最終得到沉淀物用超純水溶解,溶解后的溶液用PBS(PH7.4)作為透析液透析24h,再經(jīng)PEG20000濃縮至30mg/ml后進行Western-blotting檢測。將上述濃縮后的溶液稀釋至20mg/ml,以進樣量為4ml,流速為0....

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
符號說明
第一部分 文獻綜述
    1. 人乳鐵蛋白的結構與生物學功能
        1.1 人乳鐵蛋白的結構
        1.2 人乳鐵蛋白的生物學功能
            1.2.1 抗菌功能
            1.2.2 參與鐵的代謝
            1.2.3 抗病毒功能
            1.2.4 抗腫瘤功能
            1.2.5 抗氧化功能
            1.2.6 免疫調節(jié)功能
    2. 乳鐵蛋白的分離純化方法
        2.1 鹽析法
        2.2 超濾法
        2.3 層析技術
            2.3.1 離子交換層析
            2.3.2 吸附層析
            2.3.3 親和層析
            2.3.4 凝膠層析
    3. 轉基因動物的生物安全性
    4. 轉基因動物重組蛋白的研究進展
第二部分 正文
    第一章 奶山羊乳汁中重組人乳鐵蛋白的提取
        1. 材料與試劑
            1.1 實驗材料
            1.2 主要儀器
            1.3 主要試劑及配制
        2. 實驗方法
            2.1 重組人乳鐵蛋白的粗提
            2.2 重組人乳鐵蛋白粗提樣品的檢測
            2.3 重組人乳鐵蛋白的純化及檢測
        3. 結果
            3.1 重組人乳鐵蛋白粗提樣品的蛋白濃度測定
            3.2 重組人乳鐵蛋白粗提樣品的Western-blotting檢測
            3.3 重組人乳鐵蛋白的凝膠過濾層析洗脫液的檢測
            3.4 陽性洗脫峰收集液的濃縮及蛋白濃度測定
    第二章 轉基因奶山羊乳汁中重組人乳鐵蛋白的生物學活性分析
        1. 材料與試劑
            1.1 實驗材料
            1.2 主要儀器
            1.3 主要試劑及配制
        2. 實驗方法
            2.1 重組人乳鐵蛋白對大腸桿菌的抑菌實驗
            2.2 重組人乳鐵蛋白的鐵離子結合實驗
        3. 結果
            3.1 重組人乳鐵蛋白對大腸桿菌的抑菌實驗結果
            3.2 重組人乳鐵蛋白的鐵離子結合實驗結果
第三部分 全文討論
    1.1 重組人乳鐵蛋白的分離提純
    1.2 重組人乳鐵蛋白的生物學活性分析
參考文獻
致謝



本文編號：3756512