禽流感是由A型流感病毒引起的一種禽類呼吸道疾病綜合征，自從1878年首次報(bào)道以來，在世界范圍內(nèi)廣泛存在，無論是高致病性禽流感病毒還是低致病性禽流感病毒都給我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)和公共衛(wèi)生事業(yè)帶來了重大的威脅。 2011年從我國(guó)吉林、山東和福建三個(gè)省的98份野鴨糞便中分離鑒定出7株H5N1亞型禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)，HA基因的進(jìn)化分析表明分布于以上三個(gè)省份的5株病毒屬于2.3.2.1分支，來自山東省的2株病毒分別屬于2.3.4和7.2分支，表明不同分支的AIV在我國(guó)局部地區(qū)呈現(xiàn)共同流行的趨勢(shì)。7株病毒的HA基因核苷酸同源率在88.2%⁹9.6%之間，與各自分支代表株的核苷酸同源率在95%以上，與國(guó)內(nèi)目前流行毒株也具有較高的同源性，其中，分離毒株A/wild duck/Shandong/1/2011, A/wild duck/Shandong/628/2011和A/wild duck/Jilin/ZF/2011的內(nèi)部基因來自不同的分支，屬于重組病毒。SPF雞和鴨的人工感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明3個(gè)分離毒株對(duì)SPF雞和鴨均具有致病性，2.3.2.1...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 流感病毒的分子生物學(xué)
        1.1.1 流感病毒的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 流感病毒的編碼蛋白
        1.1.3 流感病毒的復(fù)制
        1.1.4 流感病毒的遺傳和變異
    1.2 禽流感的流行現(xiàn)狀
        1.2.1 H5N1 亞型禽流感
        1.2.2 H9N2 亞型禽流感
    1.3 禽流感疫苗的研究進(jìn)展
        1.3.1 全病毒滅活疫苗
        1.3.2 重組活載體疫苗
        1.3.3 DNA 疫苗
        1.3.4 亞單位疫苗
    1.4 流感病毒反向遺傳學(xué)操作技術(shù)的發(fā)展歷史
        1.4.1 借助輔助病毒拯救流感病毒
        1.4.2 借助質(zhì)粒系統(tǒng)拯救流感病毒
    1.5 反向遺傳學(xué)操作技術(shù)在流感病毒研究中的應(yīng)用
        1.5.1 反向遺傳學(xué)操作技術(shù)與流感病毒生物學(xué)研究
        1.5.2 反向遺傳學(xué)操作技術(shù)與流感疫苗研究
        1.5.3 反向遺傳學(xué)操作技術(shù)與流感病毒載體研究
    1.6 本研究的目的和意義
第二章 H5N1 亞型 AIV 遺傳特性分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 病毒株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 主要試劑和儀器
        2.1.4 病毒基因組 RNA 的提取及 cDNA 的合成
        2.1.5 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.1.6 目的基因的 PCR 擴(kuò)增
        2.1.7 序列測(cè)定與分析比較
        2.1.8 病毒的致病性研究
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 病毒基因組序列遺傳特性分析
        2.2.2 病毒的致病性分析
    2.3 討論
第三章 H9N2 亞型 AIV HA 基因的遺傳特性分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 病毒株
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和方法
        3.1.3 H9N2 亞型流感病毒 HA 基因的序列分析
        3.1.4 動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 PCR 擴(kuò)增結(jié)果
        3.2.2 H9N2 亞型 AIV HA 基因遺傳進(jìn)化分析
        3.2.3 HA 基因核苷酸及氨基酸的同源性分析
        3.2.4 HA 基因關(guān)鍵位點(diǎn)的氨基酸序列分析
        3.2.5 動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.3 討論
第四章 H9N2 亞型 AIV 細(xì)胞培養(yǎng)候選疫苗株的拯救
    4.1 材料與方法
        4.1.1 病毒株與質(zhì)粒
        4.1.2 細(xì)胞及載體
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.4 主要試劑和儀器
        4.1.5 EID50和 TCID50的測(cè)定
        4.1.6 pHW2000 雙向轉(zhuǎn)錄載體的工作原理
        4.1.7 rSH11 拯救的技術(shù)路線
        4.1.8 rSH11 毒株的拯救
        4.1.9 rSH11 的鑒定
        4.1.10 動(dòng)物免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)
        4.1.11 HA 和 NA 基因替換重組流感病毒的拯救
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 H9N2 亞型 AIV 的生長(zhǎng)特性
        4.2.2 重組質(zhì)粒的 PCR 鑒定
        4.2.3 聚合酶基因和核蛋白基因重組質(zhì)粒表達(dá)活性的熒光鑒定
        4.2.4 重組病毒的血凝活性檢測(cè)
        4.2.5 rSH11 的拯救
        4.2.6 rSH11 的鑒定
        4.2.7 rSH11 的免疫原性研究結(jié)果
        4.2.8 HA 和 NA 基因替換重組流感病毒的拯救
    4.3 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3756099