本文關(guān)鍵詞：TUDCA處理供體細(xì)胞對(duì)牛核移植胚胎早期發(fā)育的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：供體細(xì)胞血清饑餓處理被認(rèn)為是體細(xì)胞核移植技術(shù)成功的一個(gè)重要步驟,通過血清饑餓可以使大部分供體細(xì)胞停滯在G0/G1期,提高了其在核移植后卵胞質(zhì)中重編程和發(fā)育能力。但突然除去培養(yǎng)液中的血清,培養(yǎng)的細(xì)胞處于逆境,容易使其產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng),從而增加了細(xì)胞損傷的幾率。�；切苊撗跄懰�(TUDCA)是一種抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的小分子物質(zhì)。本研究在血清饑餓的牛胎兒成纖維細(xì)胞中添加TUDCA,減少因血清饑餓而引起的應(yīng)激反應(yīng),研究其對(duì)克隆胚發(fā)育的影響,主要研究結(jié)果如下:1、用0、50、100、150、200μM TUDC A處理牛胎兒成纖維細(xì)胞后,通過對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)表達(dá)基因GRP78和CHOP的檢測,篩選合適的處理濃度。研究顯示100μM TUDCA處理GRP78和C HOP表達(dá)量顯著低于其他各組(P0.05),表明100μM TUDCA是處理最適濃度。2、采用100μM TUDCA處理血清饑餓的牛胎兒成纖維細(xì)胞,檢測其對(duì)細(xì)胞生長狀態(tài)、凋亡基因表達(dá)和重編程相關(guān)基因的影響。結(jié)果說明,TUDCA處理組可以降低細(xì)胞凋亡率(1.1±0.2%vs 6.4±0.4%,P0.05),對(duì)細(xì)胞周期影響無差異;同時(shí)凋亡相關(guān)基因P53和BAX的表達(dá)顯著下降(P0.05);表觀修飾基因HDAC1和DNMT1的表達(dá)也顯著下降(P0.05),TUDCA處理的牛胎兒成纖維細(xì)胞中H3K9Ac水平是對(duì)照組的2.3倍(P0.05)。3、TUDCA處理的牛胎兒成纖維細(xì)胞用作體細(xì)胞核移植的供體細(xì)胞。結(jié)果顯示,核移植后,TUDCA處理與對(duì)照組相比,胚胎融合率(78.46%vs 68.89%,P0.05);卵裂率(92.09%vs 86.56%,P0.05);和囊胚率(37.87%vs 30.43%,P0.05)都顯著提高;同時(shí)囊胚中P53、HDAC1、DNMT1的表達(dá)水平也顯著低于對(duì)照組(P0.05)。囊胚細(xì)胞凋亡率也顯著降低(P0.05)。綜上所述,100μM TUDCA處理成纖維細(xì)胞,可以減少血清饑餓供體細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng),作為供體細(xì)胞有利于克隆胚的發(fā)育。
【關(guān)鍵詞】：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 胎兒成纖維細(xì)胞 �；切苊撗跄懰� 體細(xì)胞核移植 牛
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S814
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-11
• 文獻(xiàn)綜述11-23
• 第一章 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與TUDCA的研究概況11-15
• 1.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機(jī)制11-13
• 1.1.1 PERK途徑11-12
• 1.1.2 IRE1途徑12
• 1.1.3 ATF6途徑12-13
• 1.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在卵母細(xì)胞及早期胚胎中的研究13-14
• 1.3 �；切苊撗跄懰�14-15
• 第二章 體細(xì)胞核移植15-23
• 2.1 克隆胚核重構(gòu)15-16
• 2.2 DNA甲基化與重編程16-18
• 2.3 組蛋白與重編程18
• 2.4 X染色體失活與重編程18-19
• 2.5 提高體細(xì)胞核移植效率的方法19-23
• 2.5.1 供體細(xì)胞選擇19-20
• 2.5.2 受體卵母細(xì)胞處理20
• 2.5.3 卵母細(xì)胞激活20-21
• 2.5.4 供體細(xì)胞和克隆胚胎的藥物處理21-23
• 實(shí)驗(yàn)部分23-43
• 第三章 TUDCA對(duì)血清饑餓處理牛胎兒成纖維細(xì)胞的影響23-34
• 3.1 材料和設(shè)備23-24
• 3.1.1 儀器設(shè)備和耗材23-24
• 3.1.2 試劑和配制方法24
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法24-28
• 3.2.1 原代牛皮膚成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)24
• 3.2.2 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)24-25
• 3.2.3 細(xì)胞RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄25
• 3.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測25-27
• 3.2.5 細(xì)胞周期和凋亡檢測27
• 3.2.6 成纖維細(xì)胞的H3K9ac染色27
• 3.2.7 定量熒光強(qiáng)度27-28
• 3.2.8 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析28
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-31
• 3.3.1 不同濃度TUDCA對(duì)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因表達(dá)的影響28
• 3.3.2 TUDCA對(duì)牛成纖維細(xì)胞周期和凋亡的影響28-29
• 3.3.4 凋亡相關(guān)基因在成纖維細(xì)胞中表達(dá)29-30
• 3.3.5 100μM TUDCA處理對(duì)DNMT1和HDAC1表達(dá)的影響30
• 3.3.6 100μM TUDCA對(duì)成纖維細(xì)胞H3K9ac水平的影響30-31
• 3.4 討論31-33
• 3.5 小結(jié)33-34
• 第四章 TUDCA處理供體細(xì)胞對(duì)牛體細(xì)胞核移植 早期胚胎發(fā)育的影響34-43
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料34-35
• 4.1.1 儀器設(shè)備34-35
• 4.1.2 耗材、試劑和配方35
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法35-37
• 4.2.1 供體細(xì)胞的準(zhǔn)備35
• 4.2.2 卵母細(xì)胞的收集和體外成熟(IVM)培養(yǎng)35-36
• 4.2.3 體細(xì)胞核移植、融合、激活和胚胎培養(yǎng)36
• 4.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測36-37
• 4.2.5 囊胚的凋亡染色37
• 4.2.6 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析37
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-41
• 4.3.1 TUDCA對(duì)克隆胚體外發(fā)育的影響37-39
• 4.3.2 TUDCA對(duì)體細(xì)胞核移植胚胎重編程的影響39
• 4.3.3 TUDCA對(duì)克隆胚凋亡率的影響39-41
• 4.4 討論41-42
• 4.5 小結(jié)42-43
• 全文結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-52
• 致謝52-53
• 作者簡介53

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃雅瓊;石德順;譚世儉;陸鳳花;王曉麗;蘇文昌;;豬核移植供體細(xì)胞的分離培養(yǎng)及傳代的研究[J];廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué);2006年S1期

2 高國龍;;體細(xì)胞核移植中供體細(xì)胞制備研究進(jìn)展[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年06期

3 李雪峰,安志興,李煜,郭繼彤,李向臣,張涌;牛供體細(xì)胞的來源、血清饑餓和預(yù)激活對(duì)核移植卵體外胚胎發(fā)育的影響[J];動(dòng)物學(xué)研究;2003年01期

4 李向臣;躍華;劉鵬;烏云其其格;關(guān)偉軍;馬月輝;;供體細(xì)胞狀態(tài)對(duì)牛重組胚發(fā)育的影響[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2008年04期

5 曹俊偉;馬利兵;張弛;畢聰明;賽務(wù)加甫;舒建洪;華松;張涌;;供體細(xì)胞來源及預(yù)處理對(duì)牛體細(xì)胞核移植效率的影響[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2007年10期

6 張小建;李鍵;王蕊;郜勇;;供體細(xì)胞對(duì)哺乳動(dòng)物體細(xì)胞核移植的影響[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2007年03期

7 呂玲燕;孫俊銘;陸杏蓉;張曉溪;謝炳坤;潘天彪;劉慶友;崔奎青;石德順;;丙戊酸處理對(duì)不同類型供體細(xì)胞豬手工克隆胚胎發(fā)育潛能的影響[J];中國獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年03期

8 潘曉燕;楊梅;張寒瑩;王正朝;汪立琴;陳童;郭志勤;王鋒;;盤羊供體細(xì)胞對(duì)異種核移植效率的影響[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年09期

9 王超,安志興,李向臣,張涌,馬莉萍;哺乳動(dòng)物體細(xì)胞核移植中供體細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];黃牛雜志;2003年03期

10 梁素麗;李向臣;白修云;王有柱;關(guān)偉軍;;供體細(xì)胞的不同處理方法對(duì)牛核移植重構(gòu)胚發(fā)育能力的影響[J];中國畜牧獸醫(yī);2007年08期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 王二耀;姚汝強(qiáng);焦麗紅;王柳;周琪;;完整的供體細(xì)胞膜及供體胞質(zhì)對(duì)克隆胚發(fā)育的影響[A];第十屆全國生殖生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

2 李向臣;白修云;關(guān)偉軍;;供體細(xì)胞狀態(tài)對(duì)重組胚發(fā)育影響的研究[A];第十次全國畜禽遺傳標(biāo)記研討會(huì)論文集[C];2006年

3 周燕華;賈秀芬;劉慧雯;金明順;;曲古抑菌素A對(duì)小鼠供體細(xì)胞組蛋白H3(Lys9)乙酰化水平的影響[A];中國解剖學(xué)會(huì)第十一屆全國組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

4 文江;宋光啟;王凌燕;殷玉鵬;關(guān)繼羽;劉麗梅;李子義;;供體細(xì)胞類型與形態(tài)對(duì)豬早期克隆胚胎體外發(fā)育的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

5 施巧婷;王旭光;王力虎;劉賢俠;楊梅;郭志勤;;不同類型供體細(xì)胞及不同供體細(xì)胞處理方法對(duì)山羊體細(xì)胞核移植效率的影響[A];全國首屆動(dòng)物生物技術(shù)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

6 陸鳳花;石德順;韋英明;韋精衛(wèi);潘紅平;楊素芳;;供體細(xì)胞來源對(duì)水牛體細(xì)胞核移植效果的影響[A];第三屆廣西青年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（自然科學(xué)篇）[C];2004年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 記者 馬躍峰;中國成功克隆人類囊胚[N];人民日?qǐng)?bào)海外版;2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 鄧騰飛;TUDCA處理供體細(xì)胞對(duì)牛核移植胚胎早期發(fā)育的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

2 張東;TSA處理對(duì)供體細(xì)胞骨架、周期和組蛋白乙�；挠绊慬D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

3 趙玲玲;β-巰基乙醇對(duì)核移植供體細(xì)胞及胚胎發(fā)育影響的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

4 李鳳;移植前輸注供體細(xì)胞促進(jìn)單倍體相合造血干細(xì)胞植入的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

5 鮑慶江;牛體細(xì)胞核移植技術(shù)的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

6 陶林林;5-氮-2-脫氧胞苷和丁酸鈉對(duì)水牛供體細(xì)胞生長、周期、凋亡及克隆胚胎發(fā)育的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 王超;供體細(xì)胞處理方式對(duì)山羊核移植胚胎早期發(fā)育的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2003年

  本文關(guān)鍵詞：TUDCA處理供體細(xì)胞對(duì)牛核移植胚胎早期發(fā)育的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：375470