本文關鍵詞：磷酸化姬松茸多糖的制備及藥理作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：姬松茸多糖具有提高機體免疫力、降血糖、抗腫瘤生長、抗氧化、抗輻射、抗突變等多種生物活性,研究發(fā)現(xiàn),多糖的活性與它本身的分子結構有著密切關系,通過化學修飾的方法可以提高多糖溶解性,增強多糖本身的生物活性。本研究探索了姬松茸多糖磷酸化的工藝方法以及磷酸化多糖的藥理作用,為進一步開發(fā)新產(chǎn)品奠定理論基礎。(1)利用大孔樹脂吸附法對姬松茸多糖進行純化,并通過單因素試驗觀察物料比、磷酸化試劑配比、溫度、時間和pH值對姬松茸多糖磷酸根接枝量的影響,進而通過正交試驗設計法得出姬松茸多糖磷酸化的最適條件。結果表明,多糖與磷酸化試劑物料比為1:3,STPP與STMP比例為6:1,溫度95℃,時間5.5h,pH值為9,此時磷酸根接枝量為9.35%,為姬松茸多糖磷酸化的最佳反應條件。(2)利用腹腔注射法對小鼠進行磷酸化姬松茸多糖的急性毒性試驗。安全劑量范圍測定中,給藥量范圍0.25g/kg至5g/kg小鼠存活率均為100%。最大給藥量試驗中,給藥劑量分別為5g/kg、10g/kg和15g/kg,通過組織學檢查和血液生化指標檢測,所有試驗組小鼠與對照組小鼠均無顯著差異。證明磷酸化姬松茸多糖對小鼠是無毒害的。(3)用磷酸化姬松茸多糖和姬松茸多糖進行了對比試驗,測試兩種多糖對大腸桿菌、沙門氏菌、雙球菌、鏈球菌這四種細菌的抑菌效果。結果顯示兩者對大腸桿菌和沙門氏菌均有抑菌作用,且磷酸化姬松茸多糖抑菌效果較好。(4)三組小鼠分別灌服磷酸化姬松茸多糖、姬松茸多糖和生理鹽水。結果顯示磷酸化姬松茸多糖組的小鼠體重和免疫器官重量增長較快,顯著高于姬松茸多糖組和對照組。三組小鼠的各器官均正常良好,無顯著性差異。同上處理的三組小鼠灌服大腸桿菌,灌服13 d后眼球采血測定血清抗體(IgG)含量,處死后取三組小鼠脾臟,通過RT-PCR對小鼠脾臟中IL-2、IL-4、INF-γ表達水平進行測定。結果顯示,一免后磷酸化姬松茸多糖組的抗體(IgG)含量顯著高于生理鹽水對照組;二免后磷酸化姬松茸多糖的抗體含量顯著高于另兩組。一免后三組小鼠的基因表達水平無顯著性差異,而二免后兩個多糖組小鼠的基因表達水平與對照組相比均有顯著性差異,二次免疫的免疫效果優(yōu)于一次免疫。結果說明姬松茸多糖磷酸化前后均可以顯著提高二免小鼠血清抗體水平,均可以顯著提升二免小鼠脾臟中IL-2、IL-4、INF-γ的表達,且均為磷酸化姬松茸多糖效果較好。
【關鍵詞】：磷酸化 姬松茸多糖 抑菌 免疫調(diào)節(jié)
【學位授予單位】：天津農(nóng)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S853.7
【目錄】：

• 中文摘要13-14
• Abstract14-16
• 第一章 引言16-25
• 1 研究目的和意義16-17
• 2 研究現(xiàn)狀17
• 3 多糖的種類和來源17-18
• 3.1 動物多糖17-18
• 3.2 植物多糖18
• 3.3 微生物多糖18
• 4 多糖的提取方法18-19
• 4.1 熱水浸提法18-19
• 4.2 復合酶解法19
• 4.3 微波輔助法19
• 4.4 超聲波法19
• 5 多糖的生物活性19-21
• 5.1 抗氧化作用20
• 5.2 降血糖作用20
• 5.3 免疫調(diào)節(jié)作用20-21
• 5.4 抗病毒、抗腫瘤作用21
• 6 多糖的分子修飾21-25
• 6.1 硫酸化修飾22-23
• 6.2 磷酸化修飾23
• 6.3 乙�；揎�23-24
• 6.4 羧甲基化修飾24
• 6.5 烷基化修飾24-25
• 第二章 姬松茸多糖磷酸化修飾工藝的研究25-36
• 1 材料與方法25-27
• 1.1 材料25
• 1.2 方法25-27
• 1.2.1 對姬松茸多糖的純化方法優(yōu)選25-26
• 1.2.2 磷酸化反應條件的篩選26
• 1.2.3 多糖含量的測定26-27
• 1.2.4 磷酸根含量的測定27
• 1.2.5 磷酸化姬松茸多糖理化性質(zhì)的測定27
• 2 結果與分析27-34
• 2.1 大孔樹脂法對姬松茸多糖純化方法的優(yōu)選結果27-28
• 2.2 磷酸化多糖反應條件的篩選結果28-33
• 2.2.1 單因素試驗結果28-31
• 2.2.2 正交試驗結果31-33
• 2.3 磷酸化姬松茸多糖的理化性質(zhì)測定結果33-34
• 2.3.1 外觀檢測結果33
• 2.3.2 磷酸化修飾前后的紅外光譜圖分析33-34
• 3 討論34-36
• 3.1 大孔樹脂法純化姬松茸多糖的結果討論34
• 3.2 磷酸化多糖反應條件的篩選結果討論34-35
• 3.3 磷酸化姬松茸多糖的理化測定結果討論35-36
• 第三章 磷酸化姬松茸多糖的毒性試驗和體外抑菌試驗36-46
• 1 磷酸化姬松茸多糖的急性毒性試驗36-40
• 1.1 材料與方法36-37
• 1.1.1 材料36
• 1.1.2 動物分組方法36
• 1.1.3 方法36-37
• 1.2 結果與分析37-40
• 1.2.1 LD50測定結果37-38
• 1.2.2 最大給藥量試驗結果38-40
• 2 磷酸化姬松茸多糖的體外抑菌試驗40-44
• 2.1 材料與方法40-41
• 2.1.1 材料40
• 2.1.2 方法40-41
• 2.2 結果與分析41-44
• 2.2.1 牛津杯法藥敏試驗41-42
• 2.2.2 MIC最小抑菌濃度試驗結果42-44
• 3 討論44-46
• 3.1 磷酸化姬松茸多糖的急性毒性試驗討論44-45
• 3.2 磷酸化姬松茸多糖的體外抑菌試驗討論45-46
• 第四章 磷酸化姬松茸多糖對小鼠免疫作用的研究46-66
• 1 材料與方法46-51
• 1.1 材料46
• 1.2 動物分組方法46
• 1.2.1 多糖對小鼠體重、臟器指數(shù)和組織變化試驗46
• 1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗和免疫相關基因表達試驗46
• 1.3 方法46-51
• 1.3.1 多糖對小鼠體重、臟器指數(shù)和組織變化的影響46-47
• 1.3.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗47-48
• 1.3.3 磷酸化姬松茸多糖對小鼠脾臟免疫相關基因表達的影響48-51
• 2 結果與分析51-64
• 2.1 多糖對小鼠體重、臟器指數(shù)和組織變化的影響51-53
• 2.1.1 多糖對小鼠體重的影響51-52
• 2.1.2 多糖對小鼠臟器指數(shù)的影響結果52-53
• 2.1.3 組織學檢查結果53
• 2.2 免疫后臟器指數(shù)及ELISA結果53-55
• 2.2.1 多糖對一免二免小鼠臟器指數(shù)的影響53-54
• 2.2.2 多糖對小鼠血清抗體影響54-55
• 2.3 多糖對小鼠脾臟三種細胞因子表達的影響55-64
• 2.3.1 RNA純度的檢測55-56
• 2.3.2 標曲、溶解和擴增曲線56-60
• 2.3.3 多糖對INF-γ、IL-2 和IL-4 表達的調(diào)控作用60-64
• 3 討論64-66
• 3.1 多糖對小鼠體重和免疫器官指數(shù)的影響結果討論64
• 3.2 ELISA測小鼠血清中抗體（IgG）含量結果討論64-65
• 3.3 熒光定量PCR測多糖對小鼠基因的調(diào)控65-66
• 結論66-67
• 參考文獻67-76
• 附錄76-78
• 致謝78-79
• 攻讀碩士學位論文期間發(fā)表的論文79

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