本文關(guān)鍵詞：磷酸化姬松茸多糖的制備及藥理作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：姬松茸多糖具有提高機(jī)體免疫力、降血糖、抗腫瘤生長(zhǎng)、抗氧化、抗輻射、抗突變等多種生物活性,研究發(fā)現(xiàn),多糖的活性與它本身的分子結(jié)構(gòu)有著密切關(guān)系,通過(guò)化學(xué)修飾的方法可以提高多糖溶解性,增強(qiáng)多糖本身的生物活性。本研究探索了姬松茸多糖磷酸化的工藝方法以及磷酸化多糖的藥理作用,為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)新產(chǎn)品奠定理論基礎(chǔ)。(1)利用大孔樹(shù)脂吸附法對(duì)姬松茸多糖進(jìn)行純化,并通過(guò)單因素試驗(yàn)觀察物料比、磷酸化試劑配比、溫度、時(shí)間和pH值對(duì)姬松茸多糖磷酸根接枝量的影響,進(jìn)而通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法得出姬松茸多糖磷酸化的最適條件。結(jié)果表明,多糖與磷酸化試劑物料比為1:3,STPP與STMP比例為6:1,溫度95℃,時(shí)間5.5h,pH值為9,此時(shí)磷酸根接枝量為9.35%,為姬松茸多糖磷酸化的最佳反應(yīng)條件。(2)利用腹腔注射法對(duì)小鼠進(jìn)行磷酸化姬松茸多糖的急性毒性試驗(yàn)。安全劑量范圍測(cè)定中,給藥量范圍0.25g/kg至5g/kg小鼠存活率均為100%。最大給藥量試驗(yàn)中,給藥劑量分別為5g/kg、10g/kg和15g/kg,通過(guò)組織學(xué)檢查和血液生化指標(biāo)檢測(cè),所有試驗(yàn)組小鼠與對(duì)照組小鼠均無(wú)顯著差異。證明磷酸化姬松茸多糖對(duì)小鼠是無(wú)毒害的。(3)用磷酸化姬松茸多糖和姬松茸多糖進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn),測(cè)試兩種多糖對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、雙球菌、鏈球菌這四種細(xì)菌的抑菌效果。結(jié)果顯示兩者對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌均有抑菌作用,且磷酸化姬松茸多糖抑菌效果較好。(4)三組小鼠分別灌服磷酸化姬松茸多糖、姬松茸多糖和生理鹽水。結(jié)果顯示磷酸化姬松茸多糖組的小鼠體重和免疫器官重量增長(zhǎng)較快,顯著高于姬松茸多糖組和對(duì)照組。三組小鼠的各器官均正常良好,無(wú)顯著性差異。同上處理的三組小鼠灌服大腸桿菌,灌服13 d后眼球采血測(cè)定血清抗體(IgG)含量,處死后取三組小鼠脾臟,通過(guò)RT-PCR對(duì)小鼠脾臟中IL-2、IL-4、INF-γ表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示,一免后磷酸化姬松茸多糖組的抗體(IgG)含量顯著高于生理鹽水對(duì)照組;二免后磷酸化姬松茸多糖的抗體含量顯著高于另兩組。一免后三組小鼠的基因表達(dá)水平無(wú)顯著性差異,而二免后兩個(gè)多糖組小鼠的基因表達(dá)水平與對(duì)照組相比均有顯著性差異,二次免疫的免疫效果優(yōu)于一次免疫。結(jié)果說(shuō)明姬松茸多糖磷酸化前后均可以顯著提高二免小鼠血清抗體水平,均可以顯著提升二免小鼠脾臟中IL-2、IL-4、INF-γ的表達(dá),且均為磷酸化姬松茸多糖效果較好。
【關(guān)鍵詞】：磷酸化 姬松茸多糖 抑菌 免疫調(diào)節(jié)
【學(xué)位授予單位】：天津農(nóng)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S853.7
【目錄】：

• 中文摘要13-14
• Abstract14-16
• 第一章 引言16-25
• 1 研究目的和意義16-17
• 2 研究現(xiàn)狀17
• 3 多糖的種類(lèi)和來(lái)源17-18
• 3.1 動(dòng)物多糖17-18
• 3.2 植物多糖18
• 3.3 微生物多糖18
• 4 多糖的提取方法18-19
• 4.1 熱水浸提法18-19
• 4.2 復(fù)合酶解法19
• 4.3 微波輔助法19
• 4.4 超聲波法19
• 5 多糖的生物活性19-21
• 5.1 抗氧化作用20
• 5.2 降血糖作用20
• 5.3 免疫調(diào)節(jié)作用20-21
• 5.4 抗病毒、抗腫瘤作用21
• 6 多糖的分子修飾21-25
• 6.1 硫酸化修飾22-23
• 6.2 磷酸化修飾23
• 6.3 乙�；揎�23-24
• 6.4 羧甲基化修飾24
• 6.5 烷基化修飾24-25
• 第二章 姬松茸多糖磷酸化修飾工藝的研究25-36
• 1 材料與方法25-27
• 1.1 材料25
• 1.2 方法25-27
• 1.2.1 對(duì)姬松茸多糖的純化方法優(yōu)選25-26
• 1.2.2 磷酸化反應(yīng)條件的篩選26
• 1.2.3 多糖含量的測(cè)定26-27
• 1.2.4 磷酸根含量的測(cè)定27
• 1.2.5 磷酸化姬松茸多糖理化性質(zhì)的測(cè)定27
• 2 結(jié)果與分析27-34
• 2.1 大孔樹(shù)脂法對(duì)姬松茸多糖純化方法的優(yōu)選結(jié)果27-28
• 2.2 磷酸化多糖反應(yīng)條件的篩選結(jié)果28-33
• 2.2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果28-31
• 2.2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果31-33
• 2.3 磷酸化姬松茸多糖的理化性質(zhì)測(cè)定結(jié)果33-34
• 2.3.1 外觀檢測(cè)結(jié)果33
• 2.3.2 磷酸化修飾前后的紅外光譜圖分析33-34
• 3 討論34-36
• 3.1 大孔樹(shù)脂法純化姬松茸多糖的結(jié)果討論34
• 3.2 磷酸化多糖反應(yīng)條件的篩選結(jié)果討論34-35
• 3.3 磷酸化姬松茸多糖的理化測(cè)定結(jié)果討論35-36
• 第三章 磷酸化姬松茸多糖的毒性試驗(yàn)和體外抑菌試驗(yàn)36-46
• 1 磷酸化姬松茸多糖的急性毒性試驗(yàn)36-40
• 1.1 材料與方法36-37
• 1.1.1 材料36
• 1.1.2 動(dòng)物分組方法36
• 1.1.3 方法36-37
• 1.2 結(jié)果與分析37-40
• 1.2.1 LD50測(cè)定結(jié)果37-38
• 1.2.2 最大給藥量試驗(yàn)結(jié)果38-40
• 2 磷酸化姬松茸多糖的體外抑菌試驗(yàn)40-44
• 2.1 材料與方法40-41
• 2.1.1 材料40
• 2.1.2 方法40-41
• 2.2 結(jié)果與分析41-44
• 2.2.1 牛津杯法藥敏試驗(yàn)41-42
• 2.2.2 MIC最小抑菌濃度試驗(yàn)結(jié)果42-44
• 3 討論44-46
• 3.1 磷酸化姬松茸多糖的急性毒性試驗(yàn)討論44-45
• 3.2 磷酸化姬松茸多糖的體外抑菌試驗(yàn)討論45-46
• 第四章 磷酸化姬松茸多糖對(duì)小鼠免疫作用的研究46-66
• 1 材料與方法46-51
• 1.1 材料46
• 1.2 動(dòng)物分組方法46
• 1.2.1 多糖對(duì)小鼠體重、臟器指數(shù)和組織變化試驗(yàn)46
• 1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和免疫相關(guān)基因表達(dá)試驗(yàn)46
• 1.3 方法46-51
• 1.3.1 多糖對(duì)小鼠體重、臟器指數(shù)和組織變化的影響46-47
• 1.3.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)47-48
• 1.3.3 磷酸化姬松茸多糖對(duì)小鼠脾臟免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響48-51
• 2 結(jié)果與分析51-64
• 2.1 多糖對(duì)小鼠體重、臟器指數(shù)和組織變化的影響51-53
• 2.1.1 多糖對(duì)小鼠體重的影響51-52
• 2.1.2 多糖對(duì)小鼠臟器指數(shù)的影響結(jié)果52-53
• 2.1.3 組織學(xué)檢查結(jié)果53
• 2.2 免疫后臟器指數(shù)及ELISA結(jié)果53-55
• 2.2.1 多糖對(duì)一免二免小鼠臟器指數(shù)的影響53-54
• 2.2.2 多糖對(duì)小鼠血清抗體影響54-55
• 2.3 多糖對(duì)小鼠脾臟三種細(xì)胞因子表達(dá)的影響55-64
• 2.3.1 RNA純度的檢測(cè)55-56
• 2.3.2 標(biāo)曲、溶解和擴(kuò)增曲線56-60
• 2.3.3 多糖對(duì)INF-γ、IL-2 和IL-4 表達(dá)的調(diào)控作用60-64
• 3 討論64-66
• 3.1 多糖對(duì)小鼠體重和免疫器官指數(shù)的影響結(jié)果討論64
• 3.2 ELISA測(cè)小鼠血清中抗體（IgG）含量結(jié)果討論64-65
• 3.3 熒光定量PCR測(cè)多糖對(duì)小鼠基因的調(diào)控65-66
• 結(jié)論66-67
• 參考文獻(xiàn)67-76
• 附錄76-78
• 致謝78-79
• 攻讀碩士學(xué)位論文期間發(fā)表的論文79

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