發(fā)布時間：2023-02-28 19:32

　　低致病性禽流感（H9N2）是危害商品肉雞、高產(chǎn)蛋雞和肉雞的重要疫病。H9N2亞型禽流感滅活疫苗在控制H9N2的過程中發(fā)揮了重要作用，但自2009年以來，H9的免疫失敗在免疫雞群中仍時有發(fā)生,給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。近十年，中國禽病界一直試圖在分子遺傳水平上闡明H9N2亞型AIV的毒株變異趨勢，分子流行病學(xué)方面已積累了大量的毒株資料和信息。但是，這些研究對信息的分析的深度不夠，缺乏系統(tǒng)的對病毒抗原性與基因變異相關(guān)性的研究。 本研究分離測定了山東等地22株H9N2亞型禽流感病毒的HA基因的全基因序列，從分子水平上了解H9N2亞型禽流感病毒的遺傳變異的趨勢，首次篩選了六株不同分離年代，不同分支，不同分離地區(qū)H9N2亞型AIV的HA基因從抗原性變異方面及其與基因變異的相互關(guān)系進(jìn)行系統(tǒng)的研究比較。進(jìn)一步運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，分析病毒的抗原性變化與HA基因變異相關(guān)性，從而揭示我國H9N2的遺傳變異規(guī)律，為臨床全面科學(xué)防控H9N2禽流感提供強(qiáng)有力的技術(shù)支持。 首先，對國內(nèi)1998-2011年流行的22株H9N2分離株分別進(jìn)行病原鑒定和HA基因的序列測定，結(jié)合在GenBank中公開的的國內(nèi)外46株H9...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
符號說明 中文摘要 Abstract 1 前言
1.1 禽流感的命名與病原特征
    1.1.1 禽流感的國際命名
    1.1.2 禽流感病毒結(jié)構(gòu)
    1.1.3 禽流感病毒理化性質(zhì)
1.2 H9N2 亞型禽流感的流行現(xiàn)狀
1.3 H9N2 亞型禽流感病毒抗原性變異的研究現(xiàn)狀
1.4 禽流感病毒的蛋白功能及毒力因子
    1.4.1 血凝素(HA)蛋白
    
1.4.1.1 禽流感病毒的致病力是由 HA 裂解位點(diǎn)處的氨基酸序列決定
    
1.4.1.2 受體結(jié)合位點(diǎn)附近的糖鏈的變化與 HA 裂解位點(diǎn)的關(guān)系
    1.4.2 禽流感病毒致病性與神經(jīng)氨酸酶 NA 蛋白的關(guān)系
    1.4.3 禽流感病毒致病性與多聚酶復(fù)合物的關(guān)系
    1.4.4 基質(zhì)蛋白
    1.4.5 禽流感病毒致病性與非結(jié)構(gòu)蛋白的關(guān)系
    1.4.6 核蛋白與禽流感病毒致病性的關(guān)系
1.5 禽流感病毒的抗原變異
    1.5.1 抗原漂移
    1.5.2 抗原轉(zhuǎn)變
1.6 HA 基因?qū)Σ《局虏⌒缘挠绊?
1.7 禽流感病毒的復(fù)制與傳播
    1.7.1 禽流感病毒的復(fù)制機(jī)理
    1.7.2 禽流感病毒的傳播機(jī)制
1.8 HA 和 HI 實(shí)驗(yàn)的國家標(biāo)準(zhǔn) GB/T18936-2003
    1.8.1 血凝(HA)試驗(yàn)(微量法)
    1.8.2 血凝抑制(HI)試驗(yàn)(微量法)
    1.8.3 HA 和 HI 試驗(yàn)用溶液的配制
    
1.8.3.1 阿氏液配制
    
1.8.3.2 1%雞紅細(xì)胞懸液制備
    
1.8.3.3 pH7.2、0.01mol/L 的 PBS 液配制
    
1.8.3.4 棉拭子用磷酸鹽緩沖液(0.01mol/L、pH7.4，PBS)配制 2 材料和方法
2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1.1 毒株
    2.1.2 SPF 雞及 SPF 雞胚
    2.1.3 主要試劑
    2.1.4 引物設(shè)計(jì)
    2.1.5 主要儀器
    2.1.6 分子生物學(xué)分析軟件
2.2 方法
    2.2.1 H9 病毒 HA 基因序列分析
    
2.2.1.1 病毒增殖
    
2.2.1.2 病毒 RNA 的提取
    
2.2.1.3 RT-PCR
    
2.2.1.4 連接、轉(zhuǎn)化、鑒定與測序
    
2.2.1.5 HA 基因序列分析
    2.2.2 交叉中和試驗(yàn)
    
2.2.2.1 病毒 EID₅₀測定
    
2.2.2.2 陽性血清制備
    
2.2.2.3 血凝試驗(yàn)
    
2.2.2.4 血凝抑制試驗(yàn)(HI)
    
2.2.2.5 HI 交叉抑制試驗(yàn)
    
2.2.2.6 雞胚交叉中和實(shí)驗(yàn)
    2.2.3 中和指數(shù)與 HA 基因同源性的相關(guān)比較 3 結(jié)果與分析
3.1 HA 基因序列分析
    3.1.1 病毒分離和鑒定
    3.1.2 HA 基因的 RT-PCR 結(jié)果
    3.1.3 HA 基因核苷酸測序結(jié)果
    3.1.4 HA 基因核苷酸序列同源性比較
    3.1.5 HA 基因裂解位點(diǎn)和分子特征分析
    3.1.6 HA 基因系統(tǒng)進(jìn)化分析和毒株抗原性的選擇
3.2 中和試驗(yàn)結(jié)果
    3.2.1 病毒 EID₅₀的測定
    3.2.2 HI 雙交叉實(shí)驗(yàn)的中和效價
    
3.2.2.1 一免血清 H9--HI 結(jié)果
    
3.2.2.2 二免血清 H9--HI 結(jié)果
    
3.2.2.3 一免血清 HI 同源性
    
3.2.2.4 二免血清 HI 同源性
    3.2.3 雞胚中和效價和相關(guān)指數(shù)
3.3 H9N2 亞型 AIV 中和指數(shù)與氨基酸同源性的相關(guān)性 4 討論 5 結(jié)論 6 參考文獻(xiàn) 7 致謝 8 作者簡介及論文發(fā)表情況



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