狂犬病是一種古老的疾病,一直對全世界的公共衛(wèi)生造成極大的威脅,并導(dǎo)致每年約59000死于狂犬病�？袢〉闹虏≡瓰榭袢《�(Rabies virus,RABV),其逃逸宿主中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central Nervous System,CNS)天然免疫的機(jī)制目前仍未完全清楚。我們之前的研究發(fā)現(xiàn),在小鼠和犬感染模型中,狂犬病毒實(shí)驗(yàn)室固定毒株(弱毒株)能夠激活天然免疫反應(yīng),而野毒株則不能激活。星狀膠質(zhì)細(xì)胞是組成血腦屏障(Blood-brain Barrier,BBB)的重要元件,其被證實(shí)可在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中通過激活天然免疫和調(diào)控BBB通透性來限制或清除病原微生物的感染,對中樞神經(jīng)系統(tǒng)起到重要的保護(hù)作用。本文研究中,我們重點(diǎn)探索了星狀膠質(zhì)細(xì)胞在狂犬病毒感染時發(fā)揮的各方面功能。首先,為了驗(yàn)證本研究中所使用的狂犬病毒(DRV-AH08,簡稱DRV)具有野毒株的特性,我們建立了小鼠感染模型,發(fā)現(xiàn)DRV感染的小鼠死亡時間明顯早于弱毒株B2c感染的小鼠,且DRV感染小鼠后并未表現(xiàn)出炎癥反應(yīng)和外周免疫細(xì)胞入侵中樞神經(jīng)系統(tǒng)的現(xiàn)象,表明本研究中所使用的野毒株DRV具有野生型狂犬病毒的特性,符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)需求。其次,我...

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表(Abbreviation)
第一章 研究進(jìn)展綜述
    1 狂犬病毒
        1.1 狂犬病毒的種屬分類
        1.2 狂犬病毒的基因組成結(jié)構(gòu)
        1.3 狂犬病毒的感染周期
        1.4 病毒RNA轉(zhuǎn)錄復(fù)制的調(diào)控
        1.5 狂犬病毒感染宿主全過程
        1.6 實(shí)驗(yàn)室操作的狂犬病毒
        1.7 狂犬病毒侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)的機(jī)制
        1.8 狂犬病毒逆向轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制
    2 狂犬病毒激發(fā)天然免疫反應(yīng)與逃逸天然免疫的機(jī)制研究進(jìn)展
        2.1 針對狂犬病毒感染的天然免疫反應(yīng)
        2.2 狂犬病毒逃逸天然免疫反應(yīng)的機(jī)制研究進(jìn)展
            2.2.1 P蛋白在狂犬病毒逃逸天然免疫反應(yīng)中的研究進(jìn)展
            2.2.2 N蛋白對狂犬病毒逃逸天然免疫的影響
            2.2.3 M蛋白對狂犬病毒逃逸天然免疫的影響
            2.2.4 G蛋白對狂犬病毒致病性的影響
            2.2.5 狂犬病毒逃逸凋亡的發(fā)生
    3 血腦屏障BBB
    4 星狀膠質(zhì)細(xì)胞
第二章 研究目的與意義
第三章 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞、毒株、菌株和小鼠
        3.1.2 工具酶及主要試劑
        3.1.3 培養(yǎng)基及其配制
        3.1.4 主要緩沖液與相關(guān)試劑及其配制
        3.1.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
        3.1.6 分子生物學(xué)分析軟件
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 強(qiáng)毒弱毒小鼠致病性感染模型的建立
        3.2.2 原代神經(jīng)類細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        3.2.3 病毒感染細(xì)胞
        3.2.4 抑制劑處理細(xì)胞
        3.2.5 重組病毒表達(dá)B2c-DRV-(N,P,G或M)的構(gòu)建與拯救
        3.2.6 病毒滴定
        3.2.7 WesternBlot檢測蛋白表達(dá)
        3.2.8 細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        3.2.9 細(xì)胞樣品總RNA的提取、RT-PCR及實(shí)時定量PCR
        3.2.10 IFN敏感性試驗(yàn)
        3.2.11 體外BBB模型的建立
        3.2.12 細(xì)胞因子、趨化因子的定量分析
        3.2.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
第四章 結(jié)果與分析
    4.1 強(qiáng)毒株、弱毒株小鼠感染模型的建立
    4.2 狂犬病毒野毒株持續(xù)性感染原代星狀膠質(zhì)細(xì)胞
    4.3 狂犬病毒野毒株能夠持續(xù)感染人源星狀膠質(zhì)細(xì)胞
    4.4 狂犬病毒野毒能感染小鼠腦中的星狀膠質(zhì)細(xì)胞
    4.5 狂犬病毒弱毒株感染星狀膠質(zhì)細(xì)胞激發(fā)更強(qiáng)的MAVS信號通路
    4.6 狂犬病毒弱毒株感染星狀膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生更多的IFN
    4.7 狂犬病毒弱毒感染星狀細(xì)胞產(chǎn)生更多的dsRNA
    4.8 MAVS是狂犬病毒弱毒株暫時性感染星狀膠質(zhì)細(xì)胞的關(guān)鍵天然免疫通路
    4.9 狂犬病毒弱毒株能感染MAVS基因敲除的小鼠腦部星狀膠質(zhì)細(xì)胞
    4.10 MAVS是抵抗狂犬病毒弱毒株感染的重要信號分子
    4.11 TBK1在星狀膠質(zhì)細(xì)胞抵抗狂犬病毒弱毒株感染中發(fā)揮作用
    4.12 狂犬病毒野毒株的N、P、G并不能改變其感染星狀細(xì)胞的能力
    4.13 狂犬病毒弱毒株感染星狀膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生大量細(xì)胞因子
    4.14 星狀膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥因子調(diào)控BBB通透性
第五章 討論
第六章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
發(fā)表論文
致謝



本文編號：3750852