為建立一種檢測牛病毒性腹瀉、黏膜病病毒抗體的間接ELISA方法,利用昆蟲細(xì)胞真核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)E2蛋白并純化,使用純化后的蛋白作為包被抗原。確定最佳抗原包被濃度為6μg·m L-1,最佳血清稀釋度為1∶80,最佳包被液為碳酸緩沖液,最佳鹽封閉液為5%脫脂乳,最佳血清作用時間為60 min,酶標(biāo)抗體作用最佳濃度為1∶10 000;最佳底物作用時間為5 min,陽性臨界值為D450 nm≥0.282。與IDEXX的BVDV間接ELISA試劑盒比較,總符合率為91.5%,板內(nèi)和板間重復(fù)性試驗變異系數(shù)均小于10%。該方法與牛副流感病毒Ⅲ型、牛傳染性鼻氣管炎病毒、牛呼吸道合胞體病毒和牛冠狀病毒陽性血清無交叉反應(yīng)。因此,該ELISA診斷方法可用于大批量樣本抗體水平監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 抗原及血清
    1.2 主要試劑
    1.3 確定抗原包被濃度和陰、陽血清稀釋度
    1.4 選擇最佳包被液
    1.5 選擇最佳包被時間
    1.6 確定最佳封閉液
    1.7 選擇封閉時間
    1.8 確定血清最適作用時間
    1.9 確定最佳酶標(biāo)二抗工作濃度
    1.1 0 最佳底物作用時間的優(yōu)化
    1.1 1 確定臨界值
    1.1 2 特異性試驗
    1.1 3 敏感性試驗
    1.1 4 重復(fù)性試驗
    1.1 5 與商品化試劑盒的比較試驗
2 結(jié)果與分析
    2.1 最佳抗原包被濃度和最佳血清稀釋度的確定
    2.2 最佳包被液的選擇
    2.3 最佳封閉液和封閉時間的確定
    2.4 血清最適作用時間的確定
    2.5 最佳酶標(biāo)二抗工作濃度的確定
    2.6 底物工作時間的確定
    2.7 間接ELISA陰陽性臨界值的確定
    2.8 特異性試驗
    2.9 敏感性試驗
    2.1 0 重復(fù)性試驗
    2.1 1 與商品化試劑盒的對比試驗
3 討論



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