為建立廣譜型A型流感病毒(IAV)快速檢測(cè)方法,本研究選用流感病毒中高度保守的核糖核蛋白(NP)為抗原,采用真核表達(dá)系統(tǒng)純化NP蛋白,并免疫小鼠,按常規(guī)方法制備IAV NP蛋白單克隆抗體(MAb)。以制備的SC06 MAb作為捕獲抗體,XJ04 MAb作為檢測(cè)抗體,經(jīng)條件優(yōu)化,建立了檢測(cè)IAV NP蛋白的雙單抗夾心ELISA方法。結(jié)果顯示,該檢測(cè)方法捕獲抗體濃度為2 mg/mL,0.1μg/孔,檢測(cè)抗體濃度為1 mg/mL,0.05μg/孔,NP蛋白濃度在6.07 ng/mL～101.57 ng/mL時(shí)與OD_450nm呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R²>0.99。該雙單抗夾心ELISA方法可以特異性檢測(cè)多個(gè)亞型IAV,特異性強(qiáng);與血凝試驗(yàn)相比,該雙單抗夾心ELISA方法具有很高的靈敏度,可以檢測(cè)到20 ng/mL的病毒NP蛋白;批內(nèi)和批間重復(fù)性變異系數(shù)均小于8%,重復(fù)性好。利用本研究建立的雙單抗夾心ELISA方法與RT-PCR方法同時(shí)對(duì)28份馬鼻拭子樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示二者總符合率為71.43%。本研究建立的ELISA方法可以用于甲型流感...

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