人血清白蛋白(Human serum albumin, HSA)是迄今為止產(chǎn)量最大、用量最大的蛋白質(zhì)藥物�？墒乾F(xiàn)在的生產(chǎn)方式主要是人的血液通過(guò)分級(jí)過(guò)濾獲得,產(chǎn)量有限,而且因?yàn)檠獫{來(lái)源復(fù)雜,容易導(dǎo)致污染。因此,通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)構(gòu)建乳腺表達(dá)載體,利用體細(xì)胞克隆技術(shù)得到分泌含人血清白蛋白乳汁的轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物,并從動(dòng)物乳汁中提取人血清白蛋白,是解決人血清白蛋白供應(yīng)短缺的有效方法。乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人血清白蛋白具有生產(chǎn)成本低、產(chǎn)品產(chǎn)量高、活性高、易于純化等優(yōu)點(diǎn)。制約轉(zhuǎn)基因乳腺生物反應(yīng)制藥的主要因素是體細(xì)胞核移植技術(shù)效率低下。因此,本研究以延邊奶山羊和本地綿羊?yàn)檠芯繉?duì)象,對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟、延邊奶山羊-綿羊重構(gòu)胚胎的構(gòu)建及體外發(fā)育進(jìn)行了研究,以期提高核移植效率,為以后得到表達(dá)人血清白蛋白的轉(zhuǎn)基因延邊奶山羊奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。 本研究共分為三個(gè)部分,第一部分進(jìn)行了不同核成熟抑制劑及抗氧化劑對(duì)綿羊卵母細(xì)胞體外成熟的影響的研究；第二部分進(jìn)行了轉(zhuǎn)人血清白蛋白延邊奶山羊-綿羊重構(gòu)胚的構(gòu)建研究；第三部分是表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(Epi-gallocatechin-3-gallate, EGCG)對(duì)轉(zhuǎn)人血清白蛋白延...

【文章頁(yè)數(shù)】：121 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
前言
第一章 不同核成熟抑制劑及抗氧化劑對(duì)綿羊卵母細(xì)胞體外成熟的影響
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 試驗(yàn)方法
        1.3 試驗(yàn)方案
    2 結(jié)果與分析
        2.1 不同核成熟抑制劑對(duì)卵母細(xì)胞成熟的影響
        2.2 不同抗氧化劑對(duì)卵母細(xì)胞成熟的影響
    3 討論
        3.1 不同核成熟抑制劑對(duì)卵母細(xì)胞成熟的影響
        3.2 不同抗氧化劑對(duì)卵母細(xì)胞成熟的影響
    4 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第二章 轉(zhuǎn)人血清白蛋白延邊奶山羊-綿羊重構(gòu)胚的構(gòu)建
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 試驗(yàn)方法
        1.3 試驗(yàn)方案
        1.4 統(tǒng)計(jì)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 不同去核法對(duì)核移植效率的影響
        2.2 不同電融合方式對(duì)核植效率的影響
        2.3 不同激活方法對(duì)重構(gòu)胚體外發(fā)育率的影響
    3 討論
        3.1 不同去核法對(duì)核移植效率的影響
        3.2 不同電融合方式對(duì)核植效率的影響
        3.3 不同激活方法對(duì)重構(gòu)胚體外發(fā)育率的影響
    4 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三章 EGCG對(duì)轉(zhuǎn)人血清白蛋白延邊奶山羊-綿羊重構(gòu)胚體外發(fā)育質(zhì)量的影響
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 試驗(yàn)方法
        1.3 試驗(yàn)方案
    2 結(jié)果與分析
        2.1 不同濃度EGCG對(duì)囊胚率及囊胚細(xì)胞數(shù)的影響
        2.2 不同濃度EGCG對(duì)重構(gòu)胚囊胚內(nèi)GSH和ROS水平的影響
        2.3 不同時(shí)間添加EGCG對(duì)囊胚細(xì)胞凋亡的影響
    3 討論
    4 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
    結(jié)論
第四章 哺乳動(dòng)物體細(xì)胞核移植研究進(jìn)展
    1 供體細(xì)胞的選擇和培養(yǎng)
        1.1 供體細(xì)胞的選擇
        1.2 供體細(xì)胞的培養(yǎng)
    2 受體細(xì)胞的選擇與去核
        2.1 受體細(xì)胞的選擇
        2.2 受體細(xì)胞去核
    3 細(xì)胞核的移植
        3.1 帶下注射
        3.2 胞質(zhì)內(nèi)注射
        3.3 全細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)注射
    4 重構(gòu)胚的融合與激活
        4.1 重構(gòu)胚的融合
        4.2 重構(gòu)胚的激活
    5 重構(gòu)胚的培養(yǎng)與移植
        5.1 重構(gòu)胚的培養(yǎng)
        5.2 重構(gòu)胚的移植
    6 異種體細(xì)胞核移植的研究進(jìn)展
        6.1 異種核移植技術(shù)的研究歷史
        6.2 影響異種核移植技術(shù)的因素
    參考文獻(xiàn)
第五章 哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞體外成熟的研究進(jìn)展
    1 哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞體外成熟的研究概況
    2 哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞成熟及調(diào)控機(jī)制
        2.1 哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞成熟
        2.2 哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)形態(tài)學(xué)變化
        2.3 哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中的分子調(diào)控機(jī)理
    3 卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)的影響因素
        3.1 卵母細(xì)胞來(lái)源
        3.2 培養(yǎng)系統(tǒng)
        3.3 激素和生長(zhǎng)因子
    4 蛋白添加物
        4.1 血清
        4.2 卵泡液
    參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號(hào)：3748459