人血清白蛋白(Human serum albumin, HSA)是迄今為止產(chǎn)量最大、用量最大的蛋白質(zhì)藥物�？墒乾F(xiàn)在的生產(chǎn)方式主要是人的血液通過分級過濾獲得,產(chǎn)量有限,而且因為血漿來源復雜,容易導致污染。因此,通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)構(gòu)建乳腺表達載體,利用體細胞克隆技術(shù)得到分泌含人血清白蛋白乳汁的轉(zhuǎn)基因克隆動物,并從動物乳汁中提取人血清白蛋白,是解決人血清白蛋白供應(yīng)短缺的有效方法。乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人血清白蛋白具有生產(chǎn)成本低、產(chǎn)品產(chǎn)量高、活性高、易于純化等優(yōu)點。制約轉(zhuǎn)基因乳腺生物反應(yīng)制藥的主要因素是體細胞核移植技術(shù)效率低下。因此,本研究以延邊奶山羊和本地綿羊為研究對象,對卵母細胞體外成熟、延邊奶山羊-綿羊重構(gòu)胚胎的構(gòu)建及體外發(fā)育進行了研究,以期提高核移植效率,為以后得到表達人血清白蛋白的轉(zhuǎn)基因延邊奶山羊奠定堅實的基礎(chǔ)。 本研究共分為三個部分,第一部分進行了不同核成熟抑制劑及抗氧化劑對綿羊卵母細胞體外成熟的影響的研究；第二部分進行了轉(zhuǎn)人血清白蛋白延邊奶山羊-綿羊重構(gòu)胚的構(gòu)建研究；第三部分是表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epi-gallocatechin-3-gallate, EGCG)對轉(zhuǎn)人血清白蛋白延...

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
前言
第一章 不同核成熟抑制劑及抗氧化劑對綿羊卵母細胞體外成熟的影響
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
        1.3 試驗方案
    2 結(jié)果與分析
        2.1 不同核成熟抑制劑對卵母細胞成熟的影響
        2.2 不同抗氧化劑對卵母細胞成熟的影響
    3 討論
        3.1 不同核成熟抑制劑對卵母細胞成熟的影響
        3.2 不同抗氧化劑對卵母細胞成熟的影響
    4 小結(jié)
    參考文獻
第二章 轉(zhuǎn)人血清白蛋白延邊奶山羊-綿羊重構(gòu)胚的構(gòu)建
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
        1.3 試驗方案
        1.4 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 不同去核法對核移植效率的影響
        2.2 不同電融合方式對核植效率的影響
        2.3 不同激活方法對重構(gòu)胚體外發(fā)育率的影響
    3 討論
        3.1 不同去核法對核移植效率的影響
        3.2 不同電融合方式對核植效率的影響
        3.3 不同激活方法對重構(gòu)胚體外發(fā)育率的影響
    4 小結(jié)
    參考文獻
第三章 EGCG對轉(zhuǎn)人血清白蛋白延邊奶山羊-綿羊重構(gòu)胚體外發(fā)育質(zhì)量的影響
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
        1.3 試驗方案
    2 結(jié)果與分析
        2.1 不同濃度EGCG對囊胚率及囊胚細胞數(shù)的影響
        2.2 不同濃度EGCG對重構(gòu)胚囊胚內(nèi)GSH和ROS水平的影響
        2.3 不同時間添加EGCG對囊胚細胞凋亡的影響
    3 討論
    4 小結(jié)
    參考文獻
    結(jié)論
第四章 哺乳動物體細胞核移植研究進展
    1 供體細胞的選擇和培養(yǎng)
        1.1 供體細胞的選擇
        1.2 供體細胞的培養(yǎng)
    2 受體細胞的選擇與去核
        2.1 受體細胞的選擇
        2.2 受體細胞去核
    3 細胞核的移植
        3.1 帶下注射
        3.2 胞質(zhì)內(nèi)注射
        3.3 全細胞胞質(zhì)內(nèi)注射
    4 重構(gòu)胚的融合與激活
        4.1 重構(gòu)胚的融合
        4.2 重構(gòu)胚的激活
    5 重構(gòu)胚的培養(yǎng)與移植
        5.1 重構(gòu)胚的培養(yǎng)
        5.2 重構(gòu)胚的移植
    6 異種體細胞核移植的研究進展
        6.1 異種核移植技術(shù)的研究歷史
        6.2 影響異種核移植技術(shù)的因素
    參考文獻
第五章 哺乳動物卵母細胞體外成熟的研究進展
    1 哺乳動物卵母細胞體外成熟的研究概況
    2 哺乳動物卵母細胞成熟及調(diào)控機制
        2.1 哺乳動物卵母細胞成熟
        2.2 哺乳動物卵母細胞體外成熟培養(yǎng)形態(tài)學變化
        2.3 哺乳動物卵母細胞成熟過程中的分子調(diào)控機理
    3 卵母細胞體外成熟培養(yǎng)的影響因素
        3.1 卵母細胞來源
        3.2 培養(yǎng)系統(tǒng)
        3.3 激素和生長因子
    4 蛋白添加物
        4.1 血清
        4.2 卵泡液
    參考文獻
附錄
攻讀學位期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3748459