結(jié)核病是由結(jié)核桿菌復(fù)合群引起的一種人畜共患病,具有較高的感染率和死亡數(shù)。該病不僅嚴(yán)重影響人類的身體健康,還對畜牧業(yè)造成慘重的經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)統(tǒng)計(jì),每年全球約有三分之一的人口潛伏感染結(jié)核,約有940萬新發(fā)結(jié)核病例,170萬人死于結(jié)核感染。同時(shí),每年有5千萬牛感染結(jié)核,導(dǎo)致30億的損失。在人結(jié)核防治上,主要采取新生嬰兒BCG(Mycobacterium bovis bacillus Calmette-Guerin)免疫和結(jié)核病人的抗生素治療。BCG免疫只對兒童有保護(hù)效果,且不同地區(qū)免疫保護(hù)效果差異很大。結(jié)核病治療病程長,需6個(gè)月以上；藥物副作用大；且由于多耐藥藥和泛耐藥菌株的出現(xiàn),治療效果越來越差。因此,急需開發(fā)新型高效疫苗,增加對兒童的保護(hù)力,同時(shí)對成年有效。由于結(jié)核病的人獸共患特征,動物結(jié)核的防控措施是“檢疫-撲殺”,不做免疫。但“檢疫-撲殺”政策具有很多缺陷,難以實(shí)質(zhì)性實(shí)施。首先,檢疫-撲殺的成本過高,發(fā)展中國家難以承受；其次,動物結(jié)核病主要由牛分枝桿菌引起,該菌宿主范圍極廣,不同宿主間的傳播導(dǎo)致“檢疫-撲殺”政策效果差；同時(shí),野生動物難以進(jìn)行檢疫和撲殺。因此,動物結(jié)核病的防控也急需要有...

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表(Abbreviation)
1 前言
    1.1 問題的來由
    1.2 文獻(xiàn)綜述
        1.2.1 結(jié)核病研究進(jìn)展
        1.2.2 結(jié)核疫苗研究進(jìn)展
        1.2.3 結(jié)核菌特異保護(hù)性抗原的研究進(jìn)展
        1.2.4 分子佐劑的研究進(jìn)展
    1.3 目的意義
2 材料方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌種
        2.1.2 多抗及蛋白
        2.1.3 質(zhì)粒
        2.1.4 引物
        2.1.5 試劑及其配方
        2.1.6 培養(yǎng)基及血清
        2.1.7 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.8 儀器
    2.2 方法
        2.2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.2 重組質(zhì)粒pET32a-GARCE、pET32a-GARCE的表達(dá)
        2.2.3 重組BCG的構(gòu)建
        2.2.4 重組BCG外源基因的表達(dá)與鑒定
        2.2.5 重組BCG生物特性鑒定
        2.2.6 動物實(shí)驗(yàn)
3 結(jié)果與分析
    3.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.1.1 PCR擴(kuò)增GM-CSF，Ag85B,Rv3872,CFP10/ESAT6基因
        3.1.2 利用SOE串聯(lián)擴(kuò)增各目的基因
        3.1.3 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
    3.2 編碼目的基因重組質(zhì)粒的表達(dá)
        3.2.1 大腸桿菌的表達(dá)
        3.2.2 重組BCG的表達(dá)
    3.3 重組BCG的生物學(xué)特性
        3.3.1 重組BCG的菌落形態(tài)
        3.3.2 重組BCG的抗酸染色結(jié)果
        3.3.3 重組BCG的生長曲線
        3.3.4 重組BCG的穩(wěn)定性
    3.4 動物實(shí)驗(yàn)
        3.4.1 體液免疫水平的評價(jià)
        3.4.2 細(xì)胞免疫水平的評價(jià)
        3.4.3 臨床癥狀
        3.4.4 病理切片
4 討論
    4.1 融合蛋白的克隆表達(dá)及特性
    4.2 重組BCG的免疫學(xué)評價(jià)
    4.3 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3747360