MicroRNAs (miRNAs)是一組內(nèi)源性非編碼的小RNA分子,由19-22個核苷酸組成,在病毒、動物和植物等生物中廣泛存在。它可以通過與靶基因mRNA的3’端非編碼區(qū)(3’UTR)堿基完全或不完全互補(bǔ)配對,使基因mRNA直接降解或者抑制其翻譯,導(dǎo)致基因在轉(zhuǎn)錄后水平發(fā)生沉默,從而影響基因的表達(dá),進(jìn)而對細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、腫瘤的發(fā)生以及脂類代謝等過程進(jìn)行調(diào)控。目前,關(guān)于miRNAs的研究仍處于初步階段,國內(nèi)外的研究主要集中于模式生物miRNAs的發(fā)現(xiàn),以及其中與生長發(fā)育、疾病發(fā)生相關(guān)的miRNAs的功能研究,而對于重要的家畜—山羊的miRNAs的研究則相對較少。本試驗的目的在于通過分析miR-1和miR-133及其靶基因(HDAC4和SRF)在山羊骨骼肌的發(fā)育過程和骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的時空表達(dá)規(guī)律以及功能研究,以了解其在山羊骨骼肌發(fā)育過程中的重要作用。1.山羊miR-1和miR-133及其靶基因(HDAC4和SRF)時空表達(dá)規(guī)律研究。在影響山羊生長發(fā)育的眾多microRNAs中,選取了兩個重要的microRNAs (miR-1和miR-133)作為研究對象,并利用生物信息學(xué)...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 研究背景
    1.2 NcRNA
        1.2.1 NcRNA的種類
        1.2.2 NcRNA的功能
        1.2.3 NcRNA小家族成員——miRNA與siRNA
    1.3 MicroRNA的來源及其作用機(jī)制
    1.4 MicroRNA的特征
        1.4.1 MicroRNAs的存在形式
        1.4.2 MicroRNA的生物學(xué)特性
    1.5 MiRNA、miRNA-1和miRNA-133的功能及其研究進(jìn)展
        1.5.1 MiRNAs的功能
        1.5.2 MiRNA-1和miRNA-133對動物發(fā)育的調(diào)控作用
        1.5.3 MiRNA-1和miRNA-133對肌細(xì)胞增殖與分化的調(diào)控
        1.5.4 MiRNA-1和miRNA-133對動物疾病發(fā)生的影響
    1.6 MicroRNA基因的鑒定
        1.6.1 構(gòu)建富集miRNA的cDNA文庫法
        1.6.2 生物信息學(xué)分析法
    1.7 MiRNA靶基因的預(yù)測與鑒定
        1.7.1 MiRNA靶基因的預(yù)測
        1.7.2 MiRNA靶基因的鑒定
    1.8 MiRNA的研究展望
第二章 山羊miR-1和miR-133及其靶基因(HDAC4和SRF)時空表達(dá)規(guī)律研究
    引言
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗對象
        2.1.2 主要儀器與設(shè)備
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 相關(guān)溶液配置
    2.2 實驗方法
        2.2.1 MiRNA-1和miRNA-133引物設(shè)計與合成
        2.2.2 總RNA提取和cDNA合成
        2.2.3 MiR-1和miR-133靶基因的預(yù)測
        2.2.4 3'RACE法擴(kuò)增靶基因的3'UTR
        2.2.5 MiR-1和miR-133及其靶基因(HDAC4和SRF)熒光定量檢測
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 總RNA的抽提與檢測
        2.3.2 MiR-1、miR-133以及靶基因(HDAC4和SRF)基因的獲得
        2.3.3 3'RACE方法擴(kuò)增HDAC4 3'UTR和SRF 3'UTR
        2.3.4 3'RACE方法擴(kuò)增HDAC4 3'UTR和SRF 3'UTR基因測序圖
        2.3.5 熒光定量的結(jié)果
    2.4 討論
        2.4.1 RNA純度的測定與檢驗
        2.4.2 測序方式的選擇
        2.4.3 MiR-1和miR-133的靶基因預(yù)測
        2.4.4 3'RACE方法擴(kuò)增靶基因HDAC4 3'UTR和SRF 3'UTR以及測序分析
        2.4.5 山羊miR-1和miR-133以及靶基因(HDAC4和SRF)定量方法的建立
        2.4.6 關(guān)于miRNA、miR-1和miR-133及其靶基因的功能
        2.4.7 山羊生長發(fā)育與miR-1和miR-133可能的關(guān)系
    2.5 小結(jié)
第三章 MiR-1和miR-133及其靶基因(HDAC4和SRF)在山羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的表達(dá)規(guī)律
    引言
    3.1 材料和方法
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 常用溶液的配制
        3.1.4 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.1.5 細(xì)胞中總RNA的提取
        3.1.6 cDNA合成
        3.1.7 MiR-1和miR-133及其靶基因(HDAC4和SRF)在山羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的表達(dá)規(guī)律
        3.1.8 數(shù)據(jù)分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 細(xì)胞總RNA提取結(jié)果
        3.2.2 MiR-1和miR-133及其靶基因(HDAC4和SRF)在山羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的表達(dá)規(guī)律
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 MiR-1和miR-133對靶基因(HDAC4和SRF)的調(diào)控研究
    引言
    4.1 材料和方法
        4.1.1 主要試劑
        4.1.2 主要儀器
        4.1.3 常用溶液的配制
        4.1.4 Real Time PCR和Western blotting對miR-1和miR-133靶基因表達(dá)的驗證
            4.1.4.1 MiRNA mimics轉(zhuǎn)染條件的摸索
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 細(xì)胞總RNA提取結(jié)果
        4.2.2 MiRNA mimics轉(zhuǎn)染條件的摸索結(jié)果
        4.2.3 MiR-1和miR-133 mimics瞬時轉(zhuǎn)染結(jié)果
        4.2.4 MiR-1和miR-133 mimics瞬轉(zhuǎn)后HDAC4和SRF mRNA表達(dá)的檢測
        4.2.5 miR-1和miR-133 mimics轉(zhuǎn)染后HDAC4和SRF蛋白的表達(dá)的檢測
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號：3736765