旨在克隆山羊載脂蛋白E（Apolipoprotein E,APOE）基因序列并進(jìn)行生物信息學(xué)分析,明確APOE基因在山羊各組織及分化前后脂肪細(xì)胞中的表達(dá)模式,利用RT-PCR及3′RACE方法克隆山羊APOE基因序列,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time quantitative PCR,qPCR）方法檢測(cè)該基因在山羊心、肝、脾、肺、腎、肌肉、脂肪等13個(gè)組織中的表達(dá)水平以及在皮下前體脂肪細(xì)胞成脂分化過(guò)程中的表達(dá)變化情況。結(jié)果表明,RT-PCR方法獲得山羊APOE基因序列970 bp,其中ORF 951 bp,5′UTR 7 bp,3′UTR 12 bp（GenBank登錄號(hào):MN049956）;3′RACE法獲得3′UTR 152 bp（登錄號(hào):MN049957）;Targetscan和Mirbase預(yù)測(cè)得知miR-22-3p可能靶標(biāo)山羊APOE基因;蛋白預(yù)測(cè)顯示山羊APOE編碼316個(gè)氨基酸,是一個(gè)具有信號(hào)肽、無(wú)跨膜結(jié)構(gòu)域的不穩(wěn)定酸性蛋白;亞細(xì)胞定位結(jié)果發(fā)現(xiàn)APOE在細(xì)胞外、細(xì)胞質(zhì)、液泡、細(xì)胞核以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中均發(fā)揮生物學(xué)作用;進(jìn)化樹顯示該基因在各物種的同源性較高,與綿羊、藏羚羊... 

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 試驗(yàn)材料
        1.1.1 試驗(yàn)樣品采集
        1.1.2 試驗(yàn)材料
    1.2 試驗(yàn)方法
        1.2.1 山羊APOE基因克隆
        1.2.2 山羊APOE的生物信息學(xué)分析
        1.2.3 山羊APOE基因組織表達(dá)模式分析
        1.2.4 APOE基因在山羊皮下脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)模式
        1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 山羊APOE基因克隆
    2.2 生物信息學(xué)分析
        2.2.1 基本理化性質(zhì)分析
        2.2.2 蛋白結(jié)構(gòu)特征互作及靶標(biāo)miRNA預(yù)測(cè)
    2.3 APOE系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建
    2.4 山羊APOE基因組織表達(dá)譜構(gòu)建
    2.5 山羊APOE基因細(xì)胞時(shí)序表達(dá)譜構(gòu)建
3 討論與結(jié)論



本文編號(hào)：3736032