J亞群禽白血病（subgroup J of avian leukosis virus）是由反轉(zhuǎn)錄病毒科的J亞群禽白血病病毒引起的以髓細(xì)胞瘤和其他細(xì)胞惡性腫瘤為特征的傳染性腫瘤性疾病。J亞群禽白血病病毒（ALV-J）的基因排列順序從5’端至3’端依次為LTR-leader-gag-pol-env-leader-LTR，主要含有g(shù)ag、pol、env三個(gè)結(jié)構(gòu)基因及結(jié)構(gòu)基因兩側(cè)的長末端序列（long terminal repeats，LTR）。 近年來，雖然各檢測技術(shù)有所提高，但因一些條件限制，該病對(duì)我國的危害依然很大。由于亞群間各毒株比較相近，但不同遺傳特征的病毒引起的不同腫瘤的潛伏期不同，所以目前尚無有效防治J亞群禽白血病的方法；由于ALV-J的垂直傳播性、先天感染的免疫耐受雞是主要的傳染源，目前也無可用的疫苗，所以應(yīng)該另尋方法，靶向于病毒找尋攻克這一難題的方法。 RNA干擾（RNA interfrence，RNAi），是由2l nt～23nt的雙鏈RNA（Double strandedRNA，dsRNA）引起的同源的內(nèi)源性mRNA降解，從而導(dǎo)致基因表達(dá)沉默的現(xiàn)象，所以為了更... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 禽白血病病毒研究現(xiàn)狀
        1.1.1 ALV 的分類
        1.1.2 ALV-J 的發(fā)現(xiàn)
        1.1.3 ALV-J 病毒結(jié)構(gòu)特征
        1.1.4 ALV-J 的流行病學(xué)研究現(xiàn)狀
        1.1.5 ALV-J 的致病性
        1.1.6 ALV-J 的病理變化
        1.1.7 ALV-J 的診斷
        1.1.8 ALV-J 的防治
    1.2 RNA 干擾的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 RNA 干擾的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 RNAi 的作用機(jī)制
        1.2.3 siRNA 的制備
        1.2.4 siRNA 與 miRNA
        1.2.5 RNAi 的臨床應(yīng)用
        1.2.6 RNAi 在禽病研究中的應(yīng)用
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 病毒、細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 試驗(yàn)地點(diǎn)
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法及檢測指標(biāo)
        2.2.1 siRNA 篩選及 miRNA 發(fā)卡結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)
        2.2.2 真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.3 重組干擾表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化與鑒定
            2.2.3.1 感受態(tài)細(xì)胞的制備
            2.2.3.2 重組干擾表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
            2.2.3.3 去內(nèi)毒素質(zhì)粒的抽提
            2.2.3.4 質(zhì)粒的測序鑒定
        2.2.4 間接免疫熒光法對(duì) ALV-J 病毒滴度的測定
        2.2.5 DF-1 細(xì)胞禽白血病病毒的接種
        2.2.6 siRNA 重組干擾表達(dá)質(zhì)粒的單獨(dú)及聯(lián)合轉(zhuǎn)染
        2.2.7 間接免疫熒光法檢測 ALV 活病毒囊膜蛋白的表達(dá)水平
        2.2.8 Real-time PCR 對(duì) ALV-J 的 mRNA 表達(dá)水平的檢測
            2.2.8.1 細(xì)胞總 RNA 的提取
            2.2.8.2 RNA 反轉(zhuǎn)錄為 cDNA
            2.2.8.3 Real-time PCR
        2.2.9 Western blot 檢測病毒囊膜蛋白表達(dá)水平
            2.2.9.1 細(xì)胞總蛋白的提取
            2.2.9.2 細(xì)胞總蛋白 Western blot 檢測病毒囊膜蛋白表達(dá)水平
        2.2.10 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病毒及重組表達(dá)干擾質(zhì)粒的接種
        2.2.11 臨床癥狀觀察
        2.2.12 感染雞排毒監(jiān)測
        2.2.13 血液學(xué)指標(biāo)檢測
        2.2.14 大體剖檢病變觀察
        2.2.15 組織病理學(xué)觀察
3.結(jié)果與分析
    3.1 重組干擾表達(dá)質(zhì)粒測序結(jié)果
    3.2 間接免疫熒光法對(duì) ALV-J 病毒滴度的測定
    3.3 重組干擾表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率的檢測
    3.4 間接免疫熒光法檢測 ALV-J 囊膜蛋白的表達(dá)水平
    3.5 Real-time PCR 對(duì) ALV-J 的 mRNA 表達(dá)水平的檢測
    3.6 Western blot 檢測 ALV-J 囊膜蛋白的表達(dá)水平
    3.7 臨床癥狀
    3.8 感染雞排毒監(jiān)測
    3.9 血液學(xué)指標(biāo)檢測
        3.9.1 血清中抗體的檢測
        3.9.2 白細(xì)胞數(shù)量的檢測
        3.9.3 血涂片觀察
    3.10 大體剖檢病變
    3.11 組織病理學(xué)癥狀
    3.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
4.討論
5.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
研究生期間論文發(fā)表情況
致謝



本文編號(hào)：3734849