為了解偽結核棒狀桿菌（Corynebacterium pseudotuberculosis,CP）陜西分離株的pld和cp40基因的遺傳變異情況及制備檢測抗原,利用GenBank收錄CP的pld（CP001829.1）和cp40（KY041980.1）基因序列,設計合成特異性PCR引物,分別對pld和cp40基因進行擴增、序列分析和原核表達。結果表明,成功克隆了CP陜西分離株的pld和cp40全基因序列。核苷酸序列分析表明,陜西分離株pld基因與國內外已報道的偽結核棒狀桿菌核苷酸同源性在98%～100%之間,cp40基因核苷酸同源性在91%～99%之間。pld和cp40基因重組原核表達菌株經(jīng)IPTG誘導后可分別表達約為33 ku和41 ku的重組融合蛋白,重組蛋白均能與CP的陽性血清特異性結合。試驗結果可為CP陜西分離株分子生物學特性研究提供資料,為進一步研制CP抗體ELISA檢測試劑盒提供基礎。 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌種、質粒和陽性血清
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
    1.2 方法
        1.2.1 引物設計與合成
        1.2.2 pld和cp40基因的擴增及原核表達載體的構建
        1.2.3 pld和cp40基因序列分析
        1.2.4 重組PLD和CP40蛋白的原核表達
        1.2.5 PLD和CP40蛋白的Western blot分析
2 結果
    2.1 PCR擴增結果
    2.2 原核重組質粒的酶切鑒定
    2.3 pld和cp40基因序列及進化樹分析
    2.4 重組蛋白表達形式的分析
    2.5 重組PLD和CP40蛋白Western blot分析
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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