為了解偽結(jié)核棒狀桿菌（Corynebacterium pseudotuberculosis,CP）陜西分離株的pld和cp40基因的遺傳變異情況及制備檢測(cè)抗原,利用GenBank收錄CP的pld（CP001829.1）和cp40（KY041980.1）基因序列,設(shè)計(jì)合成特異性PCR引物,分別對(duì)pld和cp40基因進(jìn)行擴(kuò)增、序列分析和原核表達(dá)。結(jié)果表明,成功克隆了CP陜西分離株的pld和cp40全基因序列。核苷酸序列分析表明,陜西分離株pld基因與國(guó)內(nèi)外已報(bào)道的偽結(jié)核棒狀桿菌核苷酸同源性在98%～100%之間,cp40基因核苷酸同源性在91%～99%之間。pld和cp40基因重組原核表達(dá)菌株經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后可分別表達(dá)約為33 ku和41 ku的重組融合蛋白,重組蛋白均能與CP的陽(yáng)性血清特異性結(jié)合。試驗(yàn)結(jié)果可為CP陜西分離株分子生物學(xué)特性研究提供資料,為進(jìn)一步研制CP抗體ELISA檢測(cè)試劑盒提供基礎(chǔ)。 

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌種、質(zhì)粒和陽(yáng)性血清
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
    1.2 方法
        1.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        1.2.2 pld和cp40基因的擴(kuò)增及原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.3 pld和cp40基因序列分析
        1.2.4 重組PLD和CP40蛋白的原核表達(dá)
        1.2.5 PLD和CP40蛋白的Western blot分析
2 結(jié)果
    2.1 PCR擴(kuò)增結(jié)果
    2.2 原核重組質(zhì)粒的酶切鑒定
    2.3 pld和cp40基因序列及進(jìn)化樹(shù)分析
    2.4 重組蛋白表達(dá)形式的分析
    2.5 重組PLD和CP40蛋白Western blot分析
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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