該研究以高效組成型啟動(dòng)子P10替換pSIP401-gtamyhds中誘導(dǎo)型啟動(dòng)子,構(gòu)建重組載體pSIP401Z-gtamyhds,并以其為基礎(chǔ)框架,分別導(dǎo)入糞腸球菌（Enterococcus faecalis）來源的8種信號(hào)肽（s1～s8）,采用電轉(zhuǎn)化法將信號(hào)肽篩選載體轉(zhuǎn)入具有優(yōu)良益生特性的糞腸球菌EXW27,構(gòu)建組成型分泌表達(dá)嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的重組糞腸球菌。以發(fā)酵上清液中α-淀粉酶活性為評(píng)價(jià)指標(biāo),對(duì)8種信號(hào)肽進(jìn)行篩選,并對(duì)嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy進(jìn)行分離純化和酶學(xué)性質(zhì)研究。結(jié)果表明,信號(hào)肽s7對(duì)嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的分泌效率最高,發(fā)酵上清液中α-淀粉酶活性達(dá)到310 U/m L。重組Gt-amy的最適反應(yīng)pH值為5.0,在pH 4.0～8.0范圍內(nèi)具有較好的穩(wěn)定性,最適反應(yīng)溫度為80℃,于80℃的半衰期為3 h,在40℃條件下反應(yīng)3 h,對(duì)玉米淀粉的降解率可達(dá)55.8%。 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
        1.1.1 菌株與質(zhì)粒
        1.1.2 試劑
        1.1.3 培養(yǎng)基
    1.2 儀器與設(shè)備
    1.3 方法
        1.3.1 重組質(zhì)粒p SIP401Z-gtamyhds的構(gòu)建與鑒定
        1.3.2 信號(hào)肽篩選質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        1.3.3 重組糞腸球菌的構(gòu)建
        1.3.4 重組糞腸球菌中嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的組成型分泌表達(dá)和純化
        1.3.5 重組嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的酶學(xué)性質(zhì)分析
        1.3.6 檢測方法
        1.3.7 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
    2.1 信號(hào)肽的篩選
    2.2 重組糞腸球菌中嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的純化
    2.3 重組嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的酶學(xué)性質(zhì)
        2.3.1 重組嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的最適作用p H值和p H穩(wěn)定性
        2.3.2 重組嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的最適作用溫度和熱穩(wěn)定性
        2.3.3 嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy對(duì)玉米淀粉的降解
3 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]飼用糞腸球菌EXW27培養(yǎng)條件的響應(yīng)面優(yōu)化[J]. 郭建軍,熊大維,曾靜,魏國汶,杜建華,袁林.  中國飼料. 2019(23)
[3]嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy中結(jié)構(gòu)域C的環(huán)化重排及其對(duì)Gt-amy催化性能的影響[J]. 曾靜,郭建軍,涂熠坤,魏國汶,袁林.  食品科學(xué). 2019(20)
[4]乳酸菌用作口服疫苗表達(dá)載體的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 亓秀曄,劉乃芝,程福亮,徐海燕,谷巍.  中國釀造. 2019(06)
[5]D407A/D430A雙位點(diǎn)突變對(duì)嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶GTamy酶學(xué)性質(zhì)的影響[J]. 曾靜,郭建軍,袁林.  食品工業(yè)科技. 2018(14)



本文編號(hào)：3731499