該研究以高效組成型啟動子P10替換pSIP401-gtamyhds中誘導型啟動子,構建重組載體pSIP401Z-gtamyhds,并以其為基礎框架,分別導入糞腸球菌（Enterococcus faecalis）來源的8種信號肽（s1～s8）,采用電轉化法將信號肽篩選載體轉入具有優(yōu)良益生特性的糞腸球菌EXW27,構建組成型分泌表達嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的重組糞腸球菌。以發(fā)酵上清液中α-淀粉酶活性為評價指標,對8種信號肽進行篩選,并對嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy進行分離純化和酶學性質(zhì)研究。結果表明,信號肽s7對嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的分泌效率最高,發(fā)酵上清液中α-淀粉酶活性達到310 U/m L。重組Gt-amy的最適反應pH值為5.0,在pH 4.0～8.0范圍內(nèi)具有較好的穩(wěn)定性,最適反應溫度為80℃,于80℃的半衰期為3 h,在40℃條件下反應3 h,對玉米淀粉的降解率可達55.8%。 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
        1.1.1 菌株與質(zhì)粒
        1.1.2 試劑
        1.1.3 培養(yǎng)基
    1.2 儀器與設備
    1.3 方法
        1.3.1 重組質(zhì)粒p SIP401Z-gtamyhds的構建與鑒定
        1.3.2 信號肽篩選質(zhì)粒的構建與鑒定
        1.3.3 重組糞腸球菌的構建
        1.3.4 重組糞腸球菌中嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的組成型分泌表達和純化
        1.3.5 重組嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的酶學性質(zhì)分析
        1.3.6 檢測方法
        1.3.7 數(shù)據(jù)處理
2 結果與分析
    2.1 信號肽的篩選
    2.2 重組糞腸球菌中嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的純化
    2.3 重組嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的酶學性質(zhì)
        2.3.1 重組嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的最適作用p H值和p H穩(wěn)定性
        2.3.2 重組嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的最適作用溫度和熱穩(wěn)定性
        2.3.3 嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy對玉米淀粉的降解
3 結論


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy中結構域C的環(huán)化重排及其對Gt-amy催化性能的影響[J]. 曾靜,郭建軍,涂熠坤,魏國汶,袁林.  食品科學. 2019(20)
[4]乳酸菌用作口服疫苗表達載體的應用研究進展[J]. 亓秀曄,劉乃芝,程福亮,徐海燕,谷巍.  中國釀造. 2019(06)
[5]D407A/D430A雙位點突變對嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶GTamy酶學性質(zhì)的影響[J]. 曾靜,郭建軍,袁林.  食品工業(yè)科技. 2018(14)



本文編號：3731499