發(fā)布時間：2023-01-09 13:47

　　近年來,禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒（Reticuloendotheliosis virus, REV）與J-亞群禽白血病病毒（Avian Leukosis virus subgroup J, ALV-J）、雞傳染性貧血病毒（Chicken infectious anemia virus, CAV）和馬立克氏病病毒（Marek’s disease virus, MDV）等幾種免疫抑制性病毒的混合感染在養(yǎng)雞場中普遍存在,使得雞群免疫力低下,導(dǎo)致針對禽流感、新城疫等重要疫病的疫苗免疫失敗,并容易造成繼發(fā)感染,使疫病的診斷和防控難度加大。其中,有3大病毒性腫瘤病之稱的禽白血�。ˋL）、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥（RE）和馬立克氏�。∕D）對禽類健康的危害甚為嚴(yán)重。針對上述病原的分子流行病學(xué)研究主要集中于家禽和水禽,很少有關(guān)野生鳥類的調(diào)查報(bào)道,且目前對野生鳥類攜帶病原的研究主要集中在禽流感病毒和新城疫病毒,國內(nèi)外尚未見有關(guān)野生鳥類禽免疫抑制病病原的流行病學(xué)調(diào)查報(bào)道。野生鳥類作為許多病原攜帶者和自然宿主,可潛在傳播人和動物的重要傳染病。隨著候鳥的遷徙,攜帶某些病毒的候鳥可能會將病毒傳播到不同的地方而導(dǎo)致疾... 

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 課題背景
    1.2 REV病原學(xué)、分子病毒學(xué)及流行情況
        1.2.1 病原學(xué)
        1.2.2 基因結(jié)構(gòu)及編碼蛋白
        1.2.3 流行病學(xué)
        1.2.4 REV的危害
    1.3 ALV-J病原學(xué)、分子病毒學(xué)及流行情況
        1.3.1 ALV病毒亞型分類
        1.3.2 ALV-J基因結(jié)構(gòu)及編碼蛋白
        1.3.3 ALV-J流行病學(xué)研究
    1.4 野鳥在動物病毒傳播中的作用及意義
    1.5 蛋白相互作用研究方法
        1.5.1 酵母雙雜交技術(shù)
        1.5.2 噬菌體展示技術(shù)
        1.5.3 免疫共沉淀技術(shù)
        1.5.4 Pulldown 技術(shù)
        1.5.5 熒光共振能量轉(zhuǎn)移
    1.6 Snapin蛋白研究概況
    1.7 本研究的目的和意義
2 東北地區(qū)野生鳥類禽免疫抑制病病原感染情況調(diào)查
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.1 病料、病毒和細(xì)胞
        2.1.2 菌株、載體
        2.1.3 主要試劑及試劑盒
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 樣品采集及處理
        2.2.2 病毒基因組DNA和RNA提取
        2.2.3 禽免疫抑制病病原的特異性PCR檢測
        2.2.4 野鳥源REV分離及gp90基因遺傳演化分析
        2.2.5 野鳥源ALV-J分離及gp85基因遺傳演化分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 禽免疫抑制病病原PCR檢測結(jié)果
        2.3.2 野鳥源REV分離鑒定
        2.3.3 野鳥源REV gp90基因序列分析及遺傳演化分析
        2.3.4 DBYR1102全基因組克隆及序列分析
        2.3.5 野鳥源ALV-J分離鑒定
    2.4 討論
3 REV p30蛋白的表達(dá)純化及ELISA檢測方法的初步建立
    3.1 材料
        3.1.1 病毒株、質(zhì)粒、菌株和實(shí)驗(yàn)動物
        3.1.2 主要試劑及儀器
    3.2 方法
        3.2.1 引物設(shè)計(jì)
        3.2.2 DNA的提取及p30基因的擴(kuò)增
        3.2.3 重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        3.2.4 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)與鑒定
        3.2.5 重組蛋白的純化與濃縮
        3.2.6 融合蛋白的Western blot鑒定
        3.2.7 抗REV-p30基因多克隆抗體的制備及生物學(xué)活性檢測
        3.2.8 間接ELISA檢測方法的初步建立
        3.2.9 間接ELISA檢測方法的初步應(yīng)用
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 REVp30蛋白的原核表達(dá)及蛋白純化
        3.3.2 重組p30蛋白的表達(dá)與鑒定
        3.3.3 重組蛋白純化與濃縮
        3.3.4 融合蛋白Western blot鑒定
        3.3.5 多克隆抗體的制備及檢測
        3.3.6 融合蛋白的間接ELISA檢測結(jié)果
    3.4 討論
4 酵母雙雜交篩選與REV聚合酶PR相互作用的宿主蛋白
    4.1 材料
        4.1.1 毒株、細(xì)胞、文庫、抗體及質(zhì)粒
        4.1.2 主要儀器
        4.1.3 主要試劑、耗材
        4.1.4 毒株、細(xì)胞、文庫、抗體及質(zhì)粒主要培養(yǎng)基及培養(yǎng)液配制
    4.2 方法
        4.2.1 PR 誘餌載體的構(gòu)建
        4.2.2 pGBK-PR誘餌載體自激活性與毒性檢測
        4.2.3 酵母雙雜交篩選
        4.2.4 酵母共轉(zhuǎn)化試驗(yàn)
        4.2.5 酵母菌轉(zhuǎn)化
        4.2.6 Snapin真核表達(dá)載體構(gòu)建
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 PR-pGBKT7誘餌質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.3.2 pGBPR誘餌質(zhì)粒自激活性與毒性檢測
        4.3.3 文庫滴度檢測
        4.3.4 雜交效率檢測
        4.3.5 回轉(zhuǎn)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.6 Snapin基因的擴(kuò)增與酶切鑒定
        4.3.7 PR真核表達(dá)質(zhì)粒酶切鑒定
    4.4 討論
        4.4.1 文庫構(gòu)建與質(zhì)量鑒定
        4.4.2 誘餌質(zhì)粒構(gòu)建與檢測
        4.4.3 文庫篩選
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]安徽省五華雞J亞群禽白血病病毒gp85基因分子序列特征分析[J]. 戴銀,趙瑞宏,胡曉苗,張丹俊,夏松林,盛昌樹,楊文超,鐘國發(fā).  中國畜牧獸醫(yī). 2013(11)
[2]黃羽肉雞J亞群禽白血病腫瘤及相關(guān)病變發(fā)生規(guī)律的研究[J]. 張丹俊,趙瑞宏,沈?qū)W懷,段世鵬,胡曉苗,戴銀,潘孝成,侯宏艷,周學(xué)利,朱傳民.  中國家禽. 2013(20)
[3]髓細(xì)胞瘤型J亞群禽白血病病毒四川株SCGS-1的分離鑒定及前病毒cDNA重組質(zhì)粒的構(gòu)建[J]. 林艷,趙揚(yáng),夏靜,鄒年麗,文心田,曹三杰,黃勇.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(08)
[4]禽白血病J亞型病毒分離鑒定及其gp85基因克隆表達(dá)[J]. 李廣興,楊婷,潘龍,任曉峰,王秀榮.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(06)
[5]廣西主要地方優(yōu)良品種雞禽白血病的感染情況調(diào)查[J]. 冷畢丹,吳元俊,秦麗莉,王培坤,韋平.  廣西畜牧獸醫(yī). 2013(03)
[6]J亞群禽白血病病毒感染雞的抗原和血清抗體變化規(guī)律[J]. 杭柏林,尹麗萍,孫薇薇,梁有志,錢琨,金文杰,邵紅霞,秦愛建.  中國家禽. 2013(02)
[7]J亞群禽白血病病毒分離株HLJ09SH01株感染性克隆的構(gòu)建及其致病性研究[J]. 紀(jì)曉琳,王琦,高玉龍,王永強(qiáng),秦立廷,祁小樂,高宏雷,王笑梅.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(01)
[8]進(jìn)口海蘭褐祖代雞禽白血病感染狀態(tài)的持續(xù)觀察及與國內(nèi)發(fā)病雞群種蛋p27檢出率、病毒分離率的相關(guān)性[J]. 王麗,李傳龍,趙鵬,李德慶,張青嬋,李中明,崔治中.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(01)
[9]蘭州市及周邊地區(qū)禽白血病病毒的分子流行病學(xué)調(diào)查[J]. 管宏偉,吳潤,刁小龍,羅鵬,張莉,何軼群,艾文娜.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2012(12)
[10]蛋雞J亞群禽白血病病毒SD1009分離株的分離鑒定及全基因組序列分析[J]. 王琦,王永強(qiáng),康忠惠,高玉龍,潘偉,李久寬,秦立廷,祁小樂,高宏雷,王笑梅.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(08)

博士論文
[1]蛋雞ALV-J的分離鑒定及分子致瘤機(jī)制的研究[D]. 曲悅.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]商品蛋雞源J亞群禽白血病病毒分離株生物學(xué)特性研究[D]. 吳曉平.揚(yáng)州大學(xué) 2010
[3]雞貧血病毒結(jié)構(gòu)蛋白抗原表位研究及感染性克隆構(gòu)建[D]. 王曉艷.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2007



本文編號：3729293