金黃色葡萄球菌是世界性存在的能夠感染人與動(dòng)物的病原菌。在人類(lèi)能通過(guò)感染引起壞死性肺炎、化膿性關(guān)節(jié)炎以及敗血癥等,在養(yǎng)殖業(yè)上還能感染雞、牛和家兔等。為探討四川部分區(qū)域家兔源金黃色葡萄球菌毒力基因攜帶率、基因型差異及親緣關(guān)系的情況。本試驗(yàn)在對(duì)四川部分區(qū)域41株家兔源金黃色葡萄球菌特異性鑒定femB基因和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌MRSA和MSSA篩選的基礎(chǔ)上,通過(guò)PCR法檢測(cè)13種常見(jiàn)的毒力基因,并應(yīng)用MLST和PFGE兩種分子分型方法研究四川部分區(qū)域金黃色葡萄球菌基因型差異與親緣關(guān)系。結(jié)果顯示,41株兔源金黃色葡萄球菌在LB固體培養(yǎng)基37℃恒溫培養(yǎng)24 h后,均可形成表面光滑、厚、圓形隆起、濕潤(rùn)、邊緣整齊的菌落。革蘭氏染色鏡檢為球形,成雙或成葡萄串狀排列的G⁺球菌。41株兔源金黃色葡萄球菌femB基因PCR鑒定結(jié)果顯示均可擴(kuò)增出約651 bp的特異性條帶,結(jié)合形態(tài)學(xué)與PCR檢測(cè)結(jié)果41株菌株均為金黃色葡萄球菌。同時(shí),mecA基因擴(kuò)增結(jié)果顯示,41株金黃色葡萄球菌中共31株耐藥基因mecA陽(yáng)性,確認(rèn)為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）,檢出率為75.61%。合成13個(gè)... 

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號(hào)說(shuō)明
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1. 金葡菌基礎(chǔ)研究
        1.1 金葡菌的生物學(xué)特性
        1.2 MRSA與MSSA篩選的研究?jī)r(jià)值
    2.金葡菌毒力因子系統(tǒng)研究
        2.1 腸毒素
        2.2 溶血毒素
        2.3 殺白細(xì)胞素
        2.4 表皮剝脫素
        2.5 中毒休克綜合征毒素
    3. 金葡菌基因分型研究方法
        3.1 多位點(diǎn)序列分型
        3.2 脈沖場(chǎng)凝膠電泳
    4 目的及意義
第二章 金黃色葡萄球菌的復(fù)蘇、特異性鑒定及MRSA篩選
    1. 材料(Materials)
        1.1 細(xì)菌來(lái)源
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
    2. 方法(Method)
        2.1 病原菌的復(fù)蘇純化
            2.1.1 金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)及形態(tài)特征觀(guān)察
            2.1.2 革蘭氏染色
            2.1.3 金黃色葡萄球菌的DNA提取
            2.1.4 金黃色葡萄球菌的femB基因鑒定與MRSA篩選
    3. 結(jié)果(Result)
        3.1 分離株的表型特征
            3.1.1 細(xì)菌形態(tài)特征
        3.2 fem B基因特異性鑒定、MRSA及MSSA的篩選
    4. 討論(Discuss)
    5. 小結(jié)
第三章 金黃色葡萄球菌的毒力基因檢測(cè)
    1. 材料(Materials)
        1.1 菌株
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
    2. 方法(Method)
        2.1 金葡菌DNA片段提取
        2.2 金葡菌毒力基因PCR反應(yīng)
            2.2.1 選取毒力因子的引物合成
            2.2.2 毒力基因PCR擴(kuò)增程序及條件
    3. 結(jié)果(Result)
        3.1 毒力基因檢測(cè)結(jié)果
        3.2 MRSA與MSSA毒力基因分布情況比較
    4. 討論(Discuss)
    5. 小結(jié)
第四章 家兔源金黃色葡萄球菌的分子分型
    1. 材料(Materials)
        1.1 菌株
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
    2. 方法(Method)
        2.1 金黃色葡萄球菌多位點(diǎn)序列分型
            2.1.1 金黃色葡萄球菌基因組DNA提取
            2.1.2 管家基因的選取與引物合成
            2.1.3 金葡菌管家基因位點(diǎn)PCR反應(yīng)條件
            2.1.4 PCR產(chǎn)物處理
            2.1.5 金葡菌管家基因序列分析
        2.2 金葡菌PFGE
            2.2.1 制作膠塊
            2.2.2 細(xì)胞裂解
            2.2.3 洗膠塊
            2.2.4 DNA酶切
            2.2.5 點(diǎn)樣
            2.2.6 電泳
            2.2.7 拍照制圖
            2.2.8 PFGE聚類(lèi)分析
    3. 結(jié)果(Result)
        3.1 MLST結(jié)果
            3.1.1 鑒定金葡菌ST序列型
            3.1.2 金葡菌CC克隆群的建立
        3.2 PFGE結(jié)果
            3.2.1 金葡菌PFGE分型的相似性分析
    4. 討論(Discuss)
    5. 小結(jié)
結(jié)論(Conclusion)
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[8]四川兔源金黃色葡萄球菌毒力檢測(cè)及分子分型[J]. 向正剛,耿毅,張雨薇,楊澤曉,歐陽(yáng)萍,李亞軍,牟維豪,王世震.  華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(04)
[9]臺(tái)州市食源性金黃色葡萄球菌基因分型研究[J]. 沈偉偉,裘丹紅,王宇,盛瑩,陳喜凱.  中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志. 2017(02)
[10]我國(guó)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌分子流行病學(xué)研究進(jìn)展[J]. 薛麗麗.  臨床合理用藥雜志. 2017(01)

博士論文
[1]奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌毒力因子的克隆表達(dá)及生物活性研究[D]. 楊宏軍.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌臨床分離株的分子分型及耐藥性分析[D]. 楊延成.第三軍醫(yī)大學(xué) 2016
[2]寧夏地區(qū)牛源金黃色葡萄球菌毒力基因檢測(cè)及耐藥性研究[D]. 楊慧君.寧夏大學(xué) 2016
[3]金黃色葡萄球菌分子特征及耐藥相關(guān)分子標(biāo)志[D]. 劉靜.鄭州大學(xué) 2015
[4]不同來(lái)源金黃色葡萄球菌毒力基因分布及分子分型研究[D]. 賀朋朋.揚(yáng)州大學(xué) 2014
[5]動(dòng)物性食品源金黃色葡萄球菌的耐藥分析及blaZ、mecA和nuc基因的多重PCR檢測(cè)[D]. 劉冬香.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[6]奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌相關(guān)毒力因子的研究[D]. 王英杰.山東師范大學(xué) 2008



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