豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRS virus, PRRSV）引起的一種高度接觸性傳染病,2006～2007年,中國南部暴發(fā)以死亡率高、傳播速度快為特征的高致病性PRRSV （HP-PRRSV）,給廣大養(yǎng)殖戶帶來巨大經(jīng)濟沖擊。 為了解我國PRRSV流行情況和不同免疫背景下發(fā)病豬群相關(guān)毒株遺傳進化和變異特點,本研究對我國不同地點和時間發(fā)病豬的病料進行PRRSV流行病學(xué)檢測、病毒分離。 目前,疫苗免疫是預(yù)防和控制]3P-PRRS的重要措施,雖然商品化弱毒疫苗較滅活苗可以更快誘發(fā)機體的特異性免疫,但在臨床使用中弱毒疫苗的免疫時間、免疫劑量及免疫次數(shù)等方面經(jīng)常出現(xiàn)使用混亂的現(xiàn)象,而且對其免疫效果仍缺乏較完善的評價體系,因此本研究對市場常用的兩種商品化PRRS活疫苗JXA1-R和CH-1R進行了免疫效果評價。研究內(nèi)容如下： 1. PRRSV流行毒株的分離及遺傳變異分析 2012-2013年,本研究在湖北、湖南、廣東、河南等地采集臨床樣品720份,P... 

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表（Abbreviation)
1 文獻綜述
    1.1 PRRSV概況
    1.2 PRRSV病原學(xué)特性
        1.2.1 PRRSV分類
        1.2.2 抗原性
        1.2.3 臨床特性
        1.2.4 生物學(xué)特性
    1.3 分子生物學(xué)研究進展
        1.3.1 PRRSV基因組結(jié)構(gòu)
        1.3.2 PRRSV非結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)
        1.3.3 PRRSV結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)
        1.3.4 PRRSV基因遺傳變異和抗原性變異
        1.3.5 PRRSV毒力變異
    1.4 PRRSV的免疫學(xué)研究進展
        1.4.1 體液免疫
        1.4.2 細胞免疫
    1.5 PRRS診斷方法研究進展
        1.5.1 血清學(xué)診斷方法
            1.5.1.1 間接免疫熒光實驗(IFA)
            1.5.1.2 免疫過氧化物酶單層試驗(IPMA)
            1.5.1.3 血清中和試驗(SNT)
            1.5.1.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)
        1.5.2 分子生物學(xué)診斷方法
            1.5.2.1 PRRSV分離鑒定
            1.5.2.2 PRRSV核酸檢測
    1.6 PRRS疫苗研究進展
        1.6.1 PRRS常規(guī)疫苗
            1.6.1.1 滅活苗
            1.6.1.2 弱毒活疫苗
        1.6.2 PRRS新型疫苗
            1.6.2.1 核酸疫苗
            1.6.2.2 亞單位疫苗
            1.6.2.3 活病毒載體疫苗
2 研究目的和意義
3 材料與方法
    3.1 試驗材料
        3.1.1 毒株和細胞
        3.1.2 病料、疫苗和實驗動物
        3.1.3 工具酶和主要試劑
        3.1.4 相關(guān)試劑及其配制
        3.1.5 引物設(shè)計與合成
        3.1.6 分子生物學(xué)軟件
    3.2 實驗方法
        3.2.1 病料采集與處理
        3.2.2 血清或組織樣品總RNA的提取
        3.2.3 兩步法RT-PCR
        3.2.4 PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物的回收與純化
        3.2.5 回收后DNA片段與質(zhì)粒載體的連接反應(yīng)
        3.2.6 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        3.2.7 質(zhì)粒的小量提取
        3.2.8 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
        3.2.9 測序
        3.2.10 動物實驗
        3.2.11 PRRSV W-UH3的增殖
        3.2.12 半數(shù)細胞培養(yǎng)物感染量(TCID_(50))的測定
        3.2.13 微量中和試驗(固定病毒-稀釋血清法)
        3.2.14 IFN-γ的檢測
        3.2.15 PRRSV抗體檢測
        3.2.16 絕對熒光定量檢測病毒血癥及病毒載量
        3.2.17 病理切片制作
        3.2.18 統(tǒng)計學(xué)方法
4 結(jié)果與分析
    4.1 PRRSV遺傳變異分析
        4.1.1 PRRSV流行毒株NSP2、ORF5基因的擴增及重組質(zhì)粒的鑒定
        4.1.2 HZ-31的檢測與分離
        4.1.3 流行毒株NSP2序列分析
        4.1.4 流行毒株ORF5序列分析
    4.2 PRRSV HZ-31序列分析
        4.2.1 PRRSV HZ-31全基因組分段RT-PCR擴增結(jié)果
        4.2.2 PRRSV HZ-31全基因組序列分析
        4.2.3 PRRSV HZ-31序列分析
        4.2.4 HZ-31株毒力相關(guān)氨基酸的變異分析
    4.3 PRRS弱毒疫苗的免疫效果評價
        4.3.1 臨床癥狀觀察
        4.3.2 血清中PRRSV ELISA抗體水平
        4.3.3 血清中PRRSV中和抗體水平
        4.3.4 血清中IFN-γ水平
        4.3.5 病毒血癥
        4.3.6 鼻拭子、糞拭子排毒情況
        4.3.7 剖檢、病理觀察
        4.3.8 組織病毒載量
5 討論與結(jié)論
    5.1 討論
        5.1.1 NSP2蛋白的變異分析
        5.1.2 ORF5蛋白的變異分析
        5.1.3 HZ-31全基因組序列分析
        5.1.4 PRRS活疫苗免疫效果評價
    5.2 結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[6]豬繁殖-呼吸綜合征活疫苗對仔豬的安全性試驗[J]. 王洪峰,蔡雪輝,劉永剛,李艷華,柴文君,溫永俊,尹訓(xùn)南,褚桂芳.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2006(03)
[7]從疑似PRRS流產(chǎn)胎兒分離PRRSV的研究[J]. 郭寶清,陳章水,劉文興,崔益洙.  中國畜禽傳染病. 1996(02)

博士論文
[1]豬繁殖與呼吸綜合征病毒新型基因工程疫苗研究[D]. 江云波.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號：3727079