為建立一種準(zhǔn)確、快速的豬附紅細(xì)胞體檢測(cè)方法,根據(jù)豬附紅細(xì)胞體α-烯醇化酶基因保守序列設(shè)計(jì)特異性引物和探針,經(jīng)過(guò)篩選優(yōu)化反應(yīng)條件,建立了重組酶介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增（RAA）熒光檢測(cè)方法。結(jié)果顯示,建立的方法在39℃恒溫條件下20 min內(nèi)即可特異性地檢出豬附紅細(xì)胞體,與豬肺炎支原體、豬鏈球菌、豬大腸桿菌、豬瘟病毒、豬圓環(huán)病毒2型、非洲豬瘟病毒、健康豬血液無(wú)交叉反應(yīng),方法的最低檢出限為1 copy/μL。用該方法對(duì)15份臨床樣本進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果陽(yáng)性率為60%,與熒光定量PCR方法檢測(cè)結(jié)果一致。本研究建立的豬附紅細(xì)胞體熒光RAA檢測(cè)方法具有較好的敏感性和特異性,操作簡(jiǎn)便可應(yīng)用于豬附紅細(xì)胞體病的臨床快速檢測(cè)。 

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 樣本來(lái)源
        1.1.2 主要儀器和試劑
    1.2 方法
        1.2.1 豬附紅細(xì)胞體陽(yáng)性樣本確認(rèn)
        1.2.2 豬附紅細(xì)胞體DNA提取
        1.2.3 RAA引物、探針設(shè)計(jì)與篩選
        1.2.4 RAA擴(kuò)增體系及反應(yīng)條件優(yōu)化
        1.2.5 敏感性試驗(yàn)
        1.2.6 特異性試驗(yàn)
        1.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)
        1.2.8 臨床樣本檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 陽(yáng)性樣本確認(rèn)
    2.2 引物探針篩選
    2.3 反應(yīng)條件及擴(kuò)增體系優(yōu)化
    2.4 敏感性試驗(yàn)
    2.5 特異性試驗(yàn)
    2.6 重復(fù)性試驗(yàn)
    2.7 臨床樣品檢測(cè)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3721055