萊姆病螺旋體（Borrelia burgdorferi sensu lato）是萊姆病的病原體，它是由蜱叮咬傳播引起的一種自然疫源性疾病。目前發(fā)現(xiàn)可感染和攜帶萊姆病螺旋體的蜱至少有40余種，但經(jīng)證實能作為傳播媒介的蜱種只有大約12種。分子生物學(xué)分析顯示，目前全球萊姆病螺旋體至少可分為20個不同的基因型，不同基因型之間具有遺傳多態(tài)性和抗原異質(zhì)性，不同基因型甚至是同一基因型不同地區(qū)分離株的致病性也有較大差異。因此，隨著越來越多的菌株被分離出來，有必要從病原出發(fā)去研究這些分離株的傳播媒介和病原特性，也可為萊姆病的發(fā)病機理，臨床癥狀，預(yù)防及治療起到了很好的借鑒作用。 本研究利用我們實驗室從黑龍江革蜱中分離到的B. garinii SZ菌株，在獲得B. garinii SZ的單克隆菌株后，多位點序列分析確定了該菌株的分類地位，建立了熒光定量PCR方法，定量分析感染小鼠各組織中的菌含量，并結(jié)合病理切片，分析B. garinii SZ株的致病性及組織嗜性。以B. burgdorferi B31和B. afzelii BO23組作為感染對照組，螺旋體載量、病原體分離和病理切片結(jié)果分析顯示，B.... 

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文評閱人、答辯委員會簽名表
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 萊姆病螺旋體的基因分型
    1.2 萊姆病螺旋體的生活史
    1.3 感染與致病機制
    1.4 萊姆病螺旋體基因組
    1.5 我國萊姆病螺旋體的分布和流行
    1.6 疫苗及展望
    1.7 研究的目的和意義
第二章 萊姆病螺旋體 B. garinii SZ 株的致病性及組織嗜性分析
    2.1 材料和方法
        2.1.1 B. garinii SZ 單克隆菌株的制備
        2.1.2 菌株及培養(yǎng)
        2.1.3 多位點序列分析
        2.1.4 動物實驗
        2.1.5 臟器收集及病理切片的制備
        2.1.6 病原體分離培養(yǎng)
        2.1.7 基因組的提取
        2.1.8 Real-time PCR 方法的建立
        2.1.9 統(tǒng)計學(xué)處理
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 B. garinii SZ 單克隆菌株的獲得
        2.2.2 多位點序列分析(MLSA)
        2.2.3 熒光定量 PCR 方法的建立
        2.2.4 小鼠各組織中萊姆病螺旋體載量的定量研究
        2.2.5 小鼠組織的病理學(xué)實驗結(jié)果
    2.3 討論
第三章 我國三種蜱感染和傳播 B. garinii SZ 的研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 蜱的收集
        3.1.2 菌株
        3.1.3 實驗動物
        3.1.4 萊姆病螺旋體易感動物的確定
        3.1.5 甘肅藏區(qū)采集的青海血蜱攜帶萊姆病螺旋體的研究
        3.1.6 青海血蜱、長角血蜱和血紅扇頭蜱螺旋體非感染種群的建立
        3.1.7 萊姆病人工宿主動物模型的建立
        3.1.8 經(jīng)期傳播實驗
        3.1.9 檢測方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 萊姆病螺旋體易感動物的確定
        3.2.2 甘南地區(qū)采集的青海血蜱攜帶萊姆病螺旋體的研究
        3.2.3 青海血蜱感染和傳播不同基因型萊姆病螺旋體的能力
        3.2.4 長角血蜱感染和傳播不同基因型萊姆病螺旋體的能力
        3.2.5 血紅扇頭蜱感染和傳播不同基因型萊姆病螺旋體的能力
    3.3 討論
第四章 萊姆病螺旋體 B. garinii SZ 的全基因組測序和比較分析
    4.1 材料和方法
        4.1.1 菌株及培養(yǎng)
        4.1.2 全基因組 DNA 的提取
        4.1.3 DNA 的定量和質(zhì)檢
        4.1.4 全基因組測序
        4.1.5 生物信息分析
    4.2 結(jié)果和分析
        4.2.1 測序文庫的構(gòu)建和質(zhì)檢結(jié)果
        4.2.2 序列拼接
        4.2.3 基因預(yù)測
        4.2.4 基因注釋
        4.2.5 rRNA 和 tRNA 預(yù)測
        4.2.6 CRISPR 預(yù)測
        4.2.7 CNV 分析
        4.2.8 質(zhì)粒分析
    4.3 討論
第五章 萊姆病螺旋體 B. garinii SZ 株的質(zhì)粒及其表達分析
    5.1 材料與方法
        5.1.1 菌株及培養(yǎng)條件
        5.1.2 動物實驗
        5.1.3 臟器收集
        5.1.4 感染組織 DNA 和 RNA 的提取
        5.1.5 引物設(shè)計
        5.1.6 PCR 反應(yīng)體系
        5.1.7 熒光定量 RT-PCR
        5.1.8 統(tǒng)計學(xué)處理
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 B. burgdorferi B31 和 B. garinii SZ 菌株各質(zhì)粒標識基因的擴增情況
        5.2.2 B. burgdorferi B31 和 B. garinii SZ 菌株感染小鼠后各組織中的質(zhì)粒組分分布情況
        5.2.3 B. garinii SZ 組小鼠的腦組織、心臟、肝臟和脾臟中各質(zhì)粒組分相對 B. burgdorferi B31 組的表達豐度分析
    5.3 討論
第六章 萊姆病螺旋體 B. garinii SZ 的轉(zhuǎn)錄組測序和比較分析
    6.1 材料與方法
        6.1.1 菌株及培養(yǎng)條件
        6.1.2 mRNA 的純化及測序文庫構(gòu)建
        6.1.3 轉(zhuǎn)錄組測序
        6.1.4 生物信息分析
        6.1.5 部分差異基因的熒光定量 RT-PCR 驗證
        6.1.6 統(tǒng)計學(xué)處理
    6.2 結(jié)果與分析
        6.2.1 測序文庫質(zhì)檢結(jié)果
        6.2.2 測序結(jié)果的質(zhì)量控制
        6.2.3 數(shù)據(jù)預(yù)處理
        6.2.4 Unigenes 的組裝
        6.2.5 差異表達分析
        6.2.6 差異基因的 GO 和 KEGG 分析
        6.2.7 熒光定量 RT-PCR
    6.3 討論
第七章 全文結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]萊姆病螺旋體優(yōu)勢抗原BmpA分子克隆、高效表達與亞細胞地位[J]. 寶福凱,賴名耀,文霞,董堅,柳愛華,陳明清.  中國病原生物學(xué)雜志. 2012(11)
[2]基因組拷貝數(shù)變異及其突變機理與人類疾病[J]. 杜仁騫,金力,張鋒.  遺傳. 2011(08)
[3]黑龍江尚志地區(qū)萊姆病伯氏疏螺旋體的鑒定與遺傳進化分析[J]. 牛慶麗,楊吉飛,關(guān)貴全,付鈺廣,馬米玲,李有全,劉軍龍,劉志杰,劉愛紅,任巧云,郝雪峰,羅建勛,殷宏.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2010(07)
[4]國內(nèi)萊姆病研究進展[J]. 牛慶麗,殷宏,羅建勛.  動物醫(yī)學(xué)進展. 2009(10)
[5]中華硬蜱、越原血蜱和青海血蜱經(jīng)期傳播萊姆病螺旋體的實驗研究[J]. 孫毅,許榮滿,葛學(xué)峰,陸寶麟,劉增加.  昆蟲學(xué)報. 2003(06)
[6]全溝硬蜱經(jīng)期傳播萊姆病螺旋體的研究[J]. 孫毅,許榮滿,郭天宇,曹務(wù)春,張泮河.  中國媒介生物學(xué)及控制雜志. 2002(02)
[7]中國萊姆病螺旋體主要生物媒介的調(diào)查研究[J]. 萬康林,張哲夫,竇桂蘭,侯學(xué)霞,王宏英,張金聲,朱桂鳳.  中華流行病學(xué)雜志. 1998(05)
[8]我國萊姆病的流行病學(xué)和病原學(xué)研究[J]. 張哲夫,萬康林,張金聲,朱桂鳳,竇桂蘭,李牧青,鄭理,梁軍鋼,侯學(xué)霞,王宏英.  中華流行病學(xué)雜志. 1997(01)

博士論文
[1]我國伯氏疏螺旋體致病性及感染機制研究[D]. 蔣寶貴.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2007



本文編號：3709086