發(fā)布時間：2022-11-12 15:43

　　近些年來,隨著體外受精（IVF）技術的出現(xiàn),在體外獲得胚胎的技術取得了實質(zhì)性的發(fā)展。體外受精技術不僅應用于畜牧生產(chǎn),同時,也成為研究其他胚胎生物技術,如克隆、轉基因、胚胎干細胞分離培養(yǎng)和性別控制等的重要輔助手段。然而,在豬IVF的過程中,多精受精現(xiàn)象是一個始終無法解決的問題。所以,盡量地降低多精受精的比率,對于獲得更多高質(zhì)量的IVF胚胎來說是相當重要的。而其中,培養(yǎng)液的優(yōu)化是降低多精受精的比率的重要組成部分。 為了優(yōu)化豬體外受精技術體系,本試驗探索了在豬IVF培養(yǎng)體系中,在幾個關鍵的時間點加入不同濃度的甲基-p-環(huán)化糊精（MBCD）,經(jīng)過體外受精以及胚胎培養(yǎng)后,來評估其胚胎的發(fā)育能力以及體外受精的效率,從而探索甲基-p-環(huán)化糊精（MBCD）對豬體外受精的效率以及度隨后的胚胎發(fā)育的影響。并通過CTC染色的方法來評估精子在含甲基-p-環(huán)化糊精（MBCD）的IVF體系中的獲能狀態(tài)。 在體外受精前48h、體外受精0h、4h和6h向受精液（modified Tris-buffered medium, mTBM）中添加不同濃度（0μmol/mL、0.5μmol/mL、1μmol/L... 

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 體外受精
    1.2 多精受精
        1.2.1 體內(nèi)阻止多精受精的方法
        1.2.2 體外影響多精受精的因素
        1.2.3 減少多精受精采取的措施
    1.3 精子獲能
        1.3.1 概述
        1.3.2 精子獲能的分析方法
        1.3.3 精子獲能的機制
    1.4 環(huán)化糊精
    1.5 研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 豬卵巢
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗主要器材
        2.1.4 主要試劑的配置
    2.2 實驗方法
        2.2.1 豬精子的準備
        2.2.2 豬體外受精程序
        2.2.3 胚胎細胞核染色(Hoechst 33342染色法)
        2.2.4 金霉素熒光檢測精子(Hoechst 33258-CTC聯(lián)合染色法)
        2.2.5 統(tǒng)計分析
3 結果與分析
    3.1 MBCD對豬體外受精胚胎發(fā)育的影響
        3.1.1 IVT前48h向受精液中添加不同濃度MBCD對胚胎發(fā)育的影響
        3.1.2 IVF 0h向受精液中添加不同濃度MBCD對胚胎發(fā)育的影響
        3.1.3 IVF 4h后向受精液中添加不同濃度MBCD對胚胎發(fā)育的影響
        3.1.4 IVF 6h后向PZM-3中添加不同濃度MBCD對胚胎發(fā)育的影響
    3.2 MBCD對豬體外受精狀態(tài)的影響
        3.2.1 IVF前48h向受精液中添加不同濃度MBCD對豬受精狀態(tài)的影響
        3.2.2 IVF 0h向受精液中添加不同濃度MBCD對豬受精狀態(tài)的影響
        3.2.3 IVF 4h向受精液中添加不同濃度MBCD對豬受精狀態(tài)的影響
    3.3 MBCD對豬體外受精過程中精子獲能狀態(tài)的影響
        3.3.1 向受精液中添加0μmol/ml的MBCD對豬精子獲能狀態(tài)的影響
        3.3.2 向受精液中添加1μmol/ml的MBCD對豬精子獲能狀態(tài)的影響
        3.3.3 向受精液中添加5μmol/ml的MBCD對豬精子獲能狀態(tài)的影響
        3.3.4 向受精液中添加20μmol/ml的MBCD對豬精子獲能狀態(tài)的影響
4 討論
    4.1 MBCD在受精液中的毒性問題
    4.2 MBCD在受精液中的降解問題
    4.3 MBCD對于豬體外受精胚胎發(fā)育的影響
    4.4 MBCD對于豬體外受精效率的影響
5 結論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3706639