為建立一種靈敏、特異、快速的牛巴貝斯蟲檢測方法,針對牛巴貝斯蟲Rap-1a基因設計引物進行PCR擴增,然后構建重組質粒制作標準品,經過優(yōu)化反應體系、繪制標準曲線,建立了牛巴貝斯蟲TaqMan熒光定量PCR方法,并進行靈敏度、特異性及穩(wěn)定性檢測,同時利用該方法對37份田間樣品進行檢測。結果顯示:建立的牛巴貝斯蟲TaqMan熒光定量PCR檢測方法的標準曲線方程式為y=-3.362×Log（X）+43.32,相關系數(shù)R~2=0.999,擴增效率為98.4%。該方法的靈敏度為1.0×10~2 copies/μL,是普通PCR（1.0×10~4 copies/μL）的100倍。該方法對牛雙芽巴貝斯蟲、大巴貝斯蟲、卵形巴貝斯蟲等7種常見的牛梨形蟲病檢測結果均為陰性,組內和組間重復試驗的變異系數(shù)均小于2.5%,37份田間樣品的陽性檢出率為67.5%。結果表明,本試驗建立的牛巴貝斯蟲TaqMan熒光定量PCR靈敏度高,且特異、穩(wěn)定,適用于牛巴貝斯蟲的診斷,從而為其流行病學調查提供了快速有效的檢測方法。 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑和菌株及主要儀器
    1.2 基因組
    1.3 引物和探針的設計與合成
    1.4 常規(guī)PCR擴增
    1.5 標準品重組質粒制備
    1.6 實時熒光定量PCR反應條件優(yōu)化
    1.7 實時熒光定量PCR標準曲線建立
    1.8 敏感性試驗
    1.9 特異性試驗
    1.1 0 穩(wěn)定性試驗
    1.1 1 應用性檢測
2 結果
    2.1 標準品重組質粒制備及濃度檢測
    2.2 標準曲線繪制
    2.3 牛巴貝斯蟲Taq Man熒光定量PCR的靈敏度、特異性與穩(wěn)定性檢測
    2.4 應用性檢測
3 討論



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