豬繁殖與呼吸障礙綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是危害養(yǎng)豬業(yè)的重要病毒病,臨床表現(xiàn)以母豬的繁殖障礙、仔豬與成年豬的呼吸障礙為主要特征。2006年我國(guó)暴發(fā)了高致病性PRRSV（HP-PRRSV）,更是對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。PRRSV高度易變,加上我國(guó)批準(zhǔn)使用的弱毒疫苗毒株較多,導(dǎo)致田間野毒與疫苗毒的重組現(xiàn)象頻發(fā),新的變異毒株不斷出現(xiàn),使我國(guó)PRRSV的防治面臨巨大挑戰(zhàn)。盡管弱毒疫苗有一定的免疫保護(hù),但是在誘導(dǎo)交叉免疫,以及區(qū)分疫苗免疫與自然感染方面仍然存在很多問題。研究PRRSV基因缺失標(biāo)記致弱毒,有可能為解決上述問題提供線索。非結(jié)構(gòu)蛋白2（NSP2）是PRRSV基因組編碼的一種高度變異性的蛋白,其中間的高變區(qū)可耐受堿基突變、插入以及大片段的缺失,而且,越來越多的證據(jù)顯示PRRSV NSP2的變異與病毒的致病性有關(guān),因此,NSP2是研究基因缺失標(biāo)記致弱毒的重要候選區(qū)域。本實(shí)驗(yàn)室前期利用PRRSV/GSWW/2015毒株的感染性克隆成功構(gòu)建了缺失NSP2第519-565位氨基酸的毒株（命名為D5）,在此基... 

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
附表
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 簡(jiǎn)介
    1.2 PRRSV編碼蛋白及功能
        1.2.1 PRRSV編碼的非結(jié)構(gòu)蛋白及功能
        1.2.2 PRRSV編碼的結(jié)構(gòu)蛋白及功能
    1.3 PRRSV NSP2的遺傳變異
    1.4 PRRSV的免疫學(xué)特征
        1.4.1 PRRS的先天性免疫應(yīng)答
        1.4.2 PRRS的適應(yīng)性免疫應(yīng)答
    1.5 PRRSV的防治
    1.6 研究目的與意義
第二章 PRRSV GSWW/2015株NSP2缺失病毒的拯救與鑒定
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 病毒、細(xì)胞、載體與抗體
        2.1.2 主要試劑及儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 NSP2缺失區(qū)域與引物的設(shè)計(jì)
        2.2.2 基因合成與感染性克隆的構(gòu)建
        2.2.3 全長(zhǎng)質(zhì)粒線性化及DNA體外轉(zhuǎn)錄
        2.2.4 缺失病毒的拯救與傳代
        2.2.5 拯救病毒的鑒定
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 pGS-AB-D13/D14重組質(zhì)粒的鑒定
        2.3.2 缺失病毒的拯救與傳代
        2.3.3 缺失病毒的鑒定
    2.4 討論
第三章 親本病毒與缺失病毒的生物學(xué)特性分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 病毒株和細(xì)胞
        3.1.2 主要試劑及儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        3.2.2 病毒的復(fù)制動(dòng)力學(xué)曲線測(cè)定
        3.2.3 親本病毒與拯救病毒TCID_(50)的測(cè)定
        3.2.4 病毒感染PAM細(xì)胞后相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)
        3.2.5 數(shù)據(jù)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 病毒的復(fù)制動(dòng)力學(xué)曲線
        3.3.2 病毒的TCID_(50)測(cè)定
        3.3.3 不同缺失病毒細(xì)胞因子表達(dá)的異同
    3.4 討論
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3682686