嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）是一種革蘭陰性桿菌,常分布于淡水、土壤、污水及水產(chǎn)動(dòng)物中,是人、畜和水生動(dòng)物共患的條件致病菌,能引起水產(chǎn)動(dòng)物出血性敗血癥,嚴(yán)重危害著我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。 金屬蛋白酶（metalloproteases）為一種細(xì)菌所分泌的胞外產(chǎn)物,屬于一種蛋白酶類,其在一級(jí)結(jié)構(gòu)上差異很大,但其活性中心較為保守、常含有金屬離子（如鋅、鈷、鎳等）,其中以鋅離子居多,且是一種依靠金屬離子催化肽鍵水解的蛋白水解酶。大多數(shù)有毒力的金屬蛋白酶都是以Zn2+為催化中心的。 根據(jù)已發(fā)表的嗜水氣單胞菌金屬蛋白酶相關(guān)基因序列設(shè)計(jì)引物,以嗜水氣單胞菌A. hydrophila J-1株基因組為模板,用PCR方法擴(kuò)增得到了金屬蛋白酶基因,并將其命名為ahMP.測序分析后發(fā)現(xiàn),ahMP全長1281bp,包含一個(gè)可編碼嗜水氣單胞菌金屬蛋白酶的完整ORF,大小為1266bp,可編碼421個(gè)氨基酸,其中41個(gè)堿性氨基酸,51個(gè)酸性氨基酸,129個(gè)疏水性氨基酸,134個(gè)極性氨基酸。同源性分析后發(fā)現(xiàn),與嗜水氣單胞菌ATCC7966同源性為98%,與嗜水氣單胞菌SSU和水族箱氣單... 

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
上篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 嗜水氣單胞菌致病性研究進(jìn)展
        1 病原學(xué)特征及流行特點(diǎn)
            1.1 形態(tài)學(xué)特點(diǎn)
            1.2 血清型
            1.3 培養(yǎng)特性
            1.4 鑒定方法
            1.5 流行病學(xué)
        2 毒力因子
            2.1 外毒素(exotoxins)
            2.2 胞外蛋白酶(extracellular protease)
            2.3 S蛋白(S-layer protein)
            2.4 菌毛(fimbriae)
            2.5 外膜蛋白(out-membrane proteins OMPs)
            2.6 脂多糖(liopopolysaccharide LPS)
        3 嗜水氣單胞菌感染的防控
            3.1 免疫預(yù)防
            3.2 藥物控制
            3.3 生態(tài)控制
        4 展望
        參考文獻(xiàn)
    第二章 微生物金屬蛋白酶的研究進(jìn)展
        1 金屬蛋白酶簡介
            1.1 金屬蛋白酶家族
            1.2 金屬蛋白酶的合成、成熟及分泌
        2 金屬蛋白酶的致病作用
            2.1 血管通透性的增強(qiáng)作用
            2.2 組織損傷
            2.3 細(xì)胞毒性
        3 微生物金屬蛋白酶的應(yīng)用
            3.1 食品業(yè)對(duì)金屬蛋白酶的應(yīng)用
            3.2 日用化工業(yè)對(duì)金屬蛋白酶的應(yīng)用
            3.3 醫(yī)藥業(yè)對(duì)金屬蛋白酶的應(yīng)用
            3.4 細(xì)菌致病研究對(duì)金屬蛋白酶的應(yīng)用
        4 總結(jié)與展望
        參考文獻(xiàn)
下篇 試驗(yàn)研究
    第一章 嗜水氣單胞菌ahMP基因的克隆及分布檢測
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2 結(jié)果
            2.1 ahMP基因擴(kuò)增
            2.2 ahMP基因序列分析
            2.3 ahMP基因在氣單胞菌中的分布檢測
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
    第二章 嗜水氣單胞菌金屬蛋白酶的表達(dá)純化及其特性分析
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2 結(jié)果
            2.1 目的基因ahMP的PCR擴(kuò)增
            2.2 重組質(zhì)粒pET32a-ahMP雙酶切鑒定
            2.3 重組質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)
            2.4 重組蛋白的純化鑒定
            2.5 酶活性檢測
            2.6 重組蛋白的特性分析
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        Abstract
    第三章 嗜水氣單胞菌中金屬蛋白酶致病性分析
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2 結(jié)果
            2.1 多克隆抗體效價(jià)檢測
            2.2 Western blot分析
            2.3 金屬蛋白酶對(duì)EPC細(xì)胞的毒性
            2.4 小鼠病理組織學(xué)檢查
            2.5 小鼠血常規(guī)檢查
            2.6 鯽魚人工感染試驗(yàn)
            2.7 感染鯽魚病理組織學(xué)
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
全文總結(jié)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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