【目的】探索動物機(jī)體遭受低溫應(yīng)激及細(xì)胞冷凍過程中胰島素樣生長因子1（insulin-like growth factor, IGF-1）與RNA結(jié)合基序蛋白3（RNA-binding motif protein 3, RBM3）之間的作用關(guān)系,及IGF-1參與哺乳動物細(xì)胞抑制低溫?fù)p傷的機(jī)制�！痉椒ā矿w外培養(yǎng)牦牛卵丘細(xì)胞,采用實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR, qRT-PCR）、蛋白免疫印跡（Western blot, WB）和免疫熒光技術(shù)檢測不同濃度(0、50、100、200ng·mL^-1)IGF-1和低溫應(yīng)激（30℃、25℃）對RBM3表達(dá)影響。卵丘細(xì)胞經(jīng)最佳濃度IGF-1(100 ng·mL^-1)和對照組（0IGF-1）作用30 h后,低溫（30℃、25℃）應(yīng)激8 h,比較RBM3表達(dá)水平。評估在低溫應(yīng)激組、100 ng·m L^-1 IGF-1處理組和100 ng·mL^-1 IGF-1+RBM3抑制劑處理組,卵丘細(xì)胞25℃應(yīng)激8 h后凋亡水平差異,并從基因... 

【文章頁數(shù)】：12 頁

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 主要試劑
    1.2 牦牛卵丘細(xì)胞分離培養(yǎng)
    1.3 IGF-1和低溫應(yīng)激分別處理卵丘細(xì)胞
    1.4 不同處理組卵丘細(xì)胞凋亡率的檢測
    1.5 RBM3、Bax、Bcl-2 mRNA表達(dá)檢測
        1.5.1 細(xì)胞總RNA提取與c DNA合成
        1.5.2 Real-time PCR檢測RBM3、Bax、Bcl-2的表達(dá)
    1.6 RBM3、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)Western blot檢測
    1.7 RBM3蛋白定位檢測
    1.8 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
    2.1 IGF-1及CAPE對牦牛卵丘細(xì)胞RBM3表達(dá)的調(diào)節(jié)
    2.2 低溫應(yīng)激對不同處理組牦牛卵丘細(xì)胞RBM3表達(dá)的調(diào)節(jié)
    2.3 RBM3蛋白在不同處理組卵丘細(xì)胞分布的檢測
    2.4 不同處理組后卵丘細(xì)胞凋亡率的檢測
    2.5不同處理組卵丘細(xì)胞低溫應(yīng)激后Bax和Bcl-2表達(dá)的變化
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]EGF對牦牛凍精運(yùn)動性能、細(xì)胞凋亡和IVF胚胎發(fā)育潛力的影響[J]. 潘陽陽,王萌,余四九,崔燕,何俊峰.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(05)
[2]冷應(yīng)激條件下豬睪丸細(xì)胞中RNA結(jié)合基序蛋白3過表達(dá)對Caspase 3表達(dá)的影響[J]. 李云龍,李儉,李昌盛,李靜輝,孟宇,楊煥民,李士澤.  中國應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2016(02)
[3]胰島素樣生長因子-1（IGF-1）對牦牛卵丘細(xì)胞熱休克蛋白70（HSP70）表達(dá)的影響及其與細(xì)胞凋亡的關(guān)聯(lián)性分析[J]. 潘陽陽,崔燕,樊江峰,李谷月,余四九.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2015(09)



本文編號：3660730