目的:（1）開發(fā)一種簡單快速有效,適用于基層的DNA純化分離方法。（2）建立M.ovipneumoniae核酸擴增的簡單快速檢測技術。（3）解決M.ovipneumoniae感染的控制預防問題,探索并建立一種簡單快速、經(jīng)濟的適用于基層的M.ovipneumoniae檢測方法。方法:（1）制備超順磁性Fe₃O₄ MCNCs及Fe₃O₄/SiO₂ MCNCs,并用MCNCs從不同樣本中提取DNA,包括兔全血,兔冷凍血液和感染M.ovipneumoniae的肺組織等,對其純度、完整性及產(chǎn)量進行驗證。（2）針對M.ovipneumoniae heat shock protein 70（Hsp 70）和elongation factor Tu（EF-Tu）基因各設計一套特異性引物,利用環(huán)介導等溫擴增（LAMP）技術進行核酸擴增,聯(lián)合側向流動試紙條技術（LFD）實現(xiàn)核酸擴增可目視化檢測,建立M.ovipneumoniae LAMP-LFD快速檢測方法,并對其特異性、敏感性及臨床應用進行檢測... 

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
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引言
第一章 文獻綜述
    1 綿羊肺炎支原體的研究概況
        1.1 致病機理
        1.2 流行病學
        1.3 臨床特征
    2 綿羊肺炎支原體診斷技術
        2.1 傳統(tǒng)的病原學診斷
        2.2 分子生物學方法
        2.3 免疫學診斷方法
    3 磁性納米材料的研究進展
        3.1 制備方法
        3.2 磁性納米材料的表面修飾
        3.3 磁性納米材料的應用
    4 本研究的目的及意義
第二章 超順磁性納米簇的合成及其用于DNA提取的研究
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結果
        2.1 Fe_3O_4 MCNCs和 Fe_3O_4/SiO_2 MCNCs的表征結果
        2.2 Fe_3O_4 MCNCs提取新鮮兔血液基因組DNA
        2.3 通過Fe_3O_4 MCNCs提取冷凍血樣與新鮮血液樣本基因組DNA比較
        2.4 Fe_3O_4/SiO_2 MCNCs和 Fe_3O_4 MCNCs從新鮮兔血液中提取基因組DNA比較
        2.5 用Fe_3O_4/SiO_2 MCNCs從大腸桿菌中提取DNA
        2.6 Fe_3O_4/SiO_2 MCNCs從金黃色葡萄球菌中提取DNA
        2.7 Fe_3O_4/SiO_2 MCNCs從感染綿羊肺炎支原體的肺組織中提取基因組DNA
        2.8 PCR檢測
    3 討論
第三章 綿羊肺炎支原體環(huán)介導等溫擴增聯(lián)合橫向流動試紙條可視化檢測方法的建立
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結果
        2.1 LAMP檢測方法的條件優(yōu)化
        2.2 LAMP-LFD檢測方法的建立
        2.3 LAMP-LFD檢測方法的特異性和重復性試驗
        2.4 LAMP-LFD靈敏度分析
        2.5 臨床應用性檢測
    3 討論
第四章 綿羊肺炎支原體EF-Tu、Hsp70 蛋白間接ELISA方法的建立
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結果
        2.1 pMD18-T-EF-Tu和 pMD18-T-Hsp70 的鑒定
        2.2 pET-28a-EF-Tu和 pET-28a-Hsp70 的構建與鑒定
        2.3 IPTG最佳誘導條件以及表達形式的確定
        2.4 重組蛋白的純化
        2.5 蛋白濃度測定
        2.6 重組蛋白Western-blot分析
        2.7 間接ELISA方法反應條件的優(yōu)化
        2.8 封閉液的確定以及封閉條件的確定
        2.9 一抗最佳孵育時間的確定
        2.10 二抗最佳稀釋倍數(shù)及孵育時間的確定
        2.11 陰陽判定臨界值標準的確定
        2.12 特異性試驗
        2.13 敏感性試驗
        2.14 重復性試驗
        2.15 臨床樣本檢測
    3 討論
全文總結
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介
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本文編號：3657326