發(fā)布時(shí)間：2022-02-22 13:37

　　貓傳染性腹膜炎（FIP）是由貓傳染性腹膜炎病毒（FIPV）引起的,對(duì)家貓和野生貓科動(dòng)物可致死的重要傳染病之一,約有5%的家貓死于FIP。FIPV可以在單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中有效且持續(xù)性復(fù)制,致使感染的單核巨噬細(xì)胞激活,并造成全身性的感染。天然免疫系統(tǒng)利用模式識(shí)別受體（PRRs）對(duì)入侵病原體的病原相關(guān)分子模式（PAMPs）進(jìn)行識(shí)別,啟動(dòng)宿主抗病原微生物的反應(yīng),誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素和促炎性因子激活,進(jìn)而抵抗病原微生物的感染。冠狀病毒可以進(jìn)化出多種策略逃避宿主天然免疫應(yīng)答。然而,FIPV是否可獲得拮抗Ⅰ型干擾素應(yīng)答的能力以及免疫逃逸分子機(jī)制的相關(guān)研究報(bào)道較少,本研究以FIPV毒株DF2作為研究對(duì)象,探究FIPV對(duì)Ⅰ型干擾素信號(hào)通路激活的抑制作用,揭示FIPV nsp5阻斷信號(hào)傳遞抑制IFN-β應(yīng)答的分子機(jī)制,可為FIPV調(diào)控宿主Ⅰ型干擾素免疫應(yīng)答實(shí)現(xiàn)免疫逃逸的分子機(jī)制研究提供新思路,也為FIPV致病機(jī)制的研究和抗病毒藥物和疫苗的研發(fā)提供科學(xué)支撐。為了探究FIPV感染宿主細(xì)胞后對(duì)Ⅰ型干擾素應(yīng)答的影響,本研究利用雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)和熒光定量PCR對(duì)IFN-β啟動(dòng)子活性水平和IFN-β以及下游ISGs m... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號(hào)對(duì)照表
第一章 緒論
    1.1 貓傳染性腹膜炎及貓傳染性腹膜炎病毒的研究進(jìn)展
        1.1.1 貓傳染性腹膜炎的流行病學(xué)
        1.1.2 貓傳染性腹膜炎臨床癥狀
        1.1.3 貓傳染性腹膜炎病毒致病機(jī)制
        1.1.4 貓傳染性腹膜炎病毒基因組及編碼蛋白
        1.1.5 貓傳染性腹膜炎病毒和貓腸道冠狀病毒的鑒定
    1.2 宿主抗病毒天然免疫
        1.2.1 TLRs介導(dǎo)的信號(hào)通路
        1.2.2 RLRs介導(dǎo)的信號(hào)通路
        1.2.3 DNA受體介導(dǎo)的信號(hào)通路
    1.3 冠狀病毒調(diào)控干擾素信號(hào)通路逃逸宿主抗病毒天然免疫
    1.4 本研究的目的和意義
第二章 FIPV感染調(diào)控宿主RLR信號(hào)通路抑制Ⅰ型干擾素應(yīng)答
    2.1 材料和方法
        2.1.1 毒株和細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑和實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 貓IFN-β熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.1.4 鼠源N蛋白多克隆抗體的制備
        2.1.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.1.6 細(xì)胞總RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄
        2.1.7 FIPV-DF2 感染對(duì)IFN-β啟動(dòng)子活性檢測(cè)
        2.1.8 FIPV-DF2 感染對(duì)IFN-β和 ISGs mRNA檢測(cè)
        2.1.9 FIPV-DF2 感染對(duì)Ⅰ型干擾素通路激活分析
        2.1.10 FIPV-DF2 感染對(duì)SeV或 poly(I:C)誘導(dǎo)的IRF3 啟動(dòng)子活性激活分析
        2.1.11 FIPV-DF2 感染對(duì)IRF3 磷酸化分析
        2.1.12 FIPV-DF2 感染對(duì)IRF3在CRFK細(xì)胞中定位分析
        2.1.13 數(shù)據(jù)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 FIPV-DF2 感染不能誘導(dǎo)IFN-β應(yīng)答和ISGs表達(dá)
        2.2.2 FIPV-DF2 感染劑量依賴(lài)性的抑制Ⅰ型干擾素通路激活
        2.2.3 FIPV-DF2 感染通過(guò)阻斷IRF3 通路抑制IFN-β應(yīng)答
    2.3 討論
第三章 FIPV nsp5 通過(guò)多位點(diǎn)切割NEMO抑制Ⅰ型干擾素應(yīng)答
    3.1 材料和方法
        3.1.1 毒株和細(xì)胞
        3.1.2 主要試劑和實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.1.4 FIPV-nsp5 過(guò)表達(dá)對(duì)IFN-β應(yīng)答的作用分析
        3.1.5 FIPV-nsp5 過(guò)表達(dá)對(duì)RLR信號(hào)通路作用分析
        3.1.6 FIPV-nsp5對(duì)RLR信號(hào)通路接頭分子切割分析
        3.1.7 蛋白酶活性和凋亡相關(guān)降解途徑對(duì)FIPV-nsp5 介導(dǎo)NEMO切割的影響
        3.1.8 FIPV-nsp5 切割NEMO位點(diǎn)分析
        3.1.9 FIPV-DF2 感染對(duì)內(nèi)源性NEMO切割分析
        3.1.10 NEMO切割產(chǎn)物對(duì)干擾素信號(hào)通路激活分析
        3.1.11 FIPV-DF2 感染對(duì)IRF3 磷酸化的影響
        3.1.12 FIPV-nsp5 過(guò)表達(dá)對(duì)NEMO與 TANK相互作用的影響
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 FIPV-nsp5 抑制IFN-β應(yīng)答呈劑量依賴(lài)性且依賴(lài)其蛋白酶活性
        3.2.2 FIPV-nsp5 抑制RIG-I介導(dǎo)的Ⅰ型干擾素信號(hào)通路
        3.2.3 FIPV-nsp5 切割RLR信號(hào)通路中的接頭分子NEMO
        3.2.4 FIPV-nsp5 切割NEMO依賴(lài)其蛋白酶活性
        3.2.5 FIPV-nsp5 切割NEMO位點(diǎn)
        3.2.6 內(nèi)源性NEMO在感染FIPV-DF2的CRFK細(xì)胞中被切割
        3.2.7 FIPV-nsp5 通過(guò)切割NEMO抑制RIG-I介導(dǎo)的Ⅰ型干擾素信號(hào)通路
    3.3 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]冠狀病毒非結(jié)構(gòu)蛋白的研究進(jìn)展[J]. 邊葶藶,周繼勇,廖敏.  中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2013(04)



本文編號(hào)：3639555