為了建立一種能夠鑒別檢測裂谷熱病毒野毒株與NSs缺失型疫苗株的熒光定量RT-PCR方法,本研究通過對(duì)裂谷熱病毒基因組序列進(jìn)行比較分析,選擇其S節(jié)段NSs基因及L節(jié)段L基因的無二級(jí)結(jié)構(gòu)且保守的區(qū)段,分別設(shè)計(jì)多對(duì)引物和探針,通過試驗(yàn)驗(yàn)證并優(yōu)化反應(yīng)條件,篩選出最佳引物和探針的組合,建立了可以快速檢測裂谷熱病毒并區(qū)分NSs基因缺失疫苗株和野毒株的雙重?zé)晒舛縍T-PCR方法。利用該方法檢測羊臨床常見病原,結(jié)果顯示該方法僅對(duì)裂谷熱質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品樣品檢測為陽性,不與羊常見的其他病原出現(xiàn)陽性反應(yīng),特異性強(qiáng);將裂谷熱質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品10倍倍比稀釋后利用本研究建立的方法進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示,該方法對(duì)NSs和L基因重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的檢測下限分別為10拷貝/μL和100拷貝/μL,敏感度高;重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,該方法組內(nèi)和組間變異系數(shù)均小于2%,重復(fù)性好。將NSs缺失型和非缺失型質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染細(xì)胞,提取核酸,利用本方法進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示該方法可有效區(qū)分NSs基因缺失型和非缺失型核酸樣品。本研究建立的雙重?zé)晒舛縍T-PCR方法為鑒別野生病毒株和NSs缺失型疫苗株奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,42(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑
    1.2 疫苗及相關(guān)病原
    1.3引物和探針的設(shè)計(jì)
    1.4 重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建
    1.5 雙重?zé)晒舛縍T-PCR方法反應(yīng)體系的優(yōu)化及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    1.6 特異性試驗(yàn)
    1.7 敏感性試驗(yàn)
    1.8 重復(fù)性試驗(yàn)
    1.9 對(duì)野生型和缺失型病毒核酸樣品的檢測
    1.10臨床樣品的檢測
2 結(jié)果
    2.1 雙重?zé)晒舛糠椒ǖ慕⒑蛢?yōu)化
    2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    2.3 特異性試驗(yàn)結(jié)果
    2.4 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
    2.5 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
    2.6 野生型和缺失型病毒核酸樣品的檢測
    2.7 臨床樣品的檢測
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]山羊皰疹病毒Ⅰ型的分離鑒定與致病性[J]. 郝飛,毛立,李文良,李基棕,楊蕾蕾,張紋紋,孫敏,鐘純燕,劉茂軍,江杰元.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(08)
[2]血清15與21型藍(lán)舌病病毒的分離與鑒定[J]. 李文良,毛立,楊蕾蕾,許寶軍,唐朝忠,楊恒,郝飛,張紋紋,邵坤,李華春,江杰元.  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2018(03)
[3]山羊源副流感病毒3型的分離與分子鑒定[J]. 李文良,毛立,程素平,王秋生,黃加春,張紋紋,楊蕾蕾,江杰元.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2015(02)
[4]裂谷熱病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 蓋微微,遲航,鄭學(xué)星,薛向紅,高玉偉,王化磊,王鐵成,趙永坤,馮娜,黃耕,楊松濤,夏咸柱.  中國病原生物學(xué)雜志. 2014(01)
[5]裂谷熱病毒熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 楊志紅,李長田,楊宇,白琳,魏蓮,王靜.  中國國境衛(wèi)生檢疫雜志. 2012(03)
[6]裂谷熱病毒TaqMan熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 朱曉文,李林,桑曉宇,高玉偉,胡桂學(xué),馮娜,王鐵成,步志高,夏咸柱.  中國人獸共患病學(xué)報(bào). 2012(04)



本文編號(hào)：3639527