發(fā)布時間：2022-02-22 13:20

　　為了建立一種能夠鑒別檢測裂谷熱病毒野毒株與NSs缺失型疫苗株的熒光定量RT-PCR方法,本研究通過對裂谷熱病毒基因組序列進行比較分析,選擇其S節(jié)段NSs基因及L節(jié)段L基因的無二級結構且保守的區(qū)段,分別設計多對引物和探針,通過試驗驗證并優(yōu)化反應條件,篩選出最佳引物和探針的組合,建立了可以快速檢測裂谷熱病毒并區(qū)分NSs基因缺失疫苗株和野毒株的雙重熒光定量RT-PCR方法。利用該方法檢測羊臨床常見病原,結果顯示該方法僅對裂谷熱質粒標準品樣品檢測為陽性,不與羊常見的其他病原出現(xiàn)陽性反應,特異性強;將裂谷熱質粒標準品10倍倍比稀釋后利用本研究建立的方法進行檢測,結果顯示,該方法對NSs和L基因重組質粒標準品的檢測下限分別為10拷貝/μL和100拷貝/μL,敏感度高;重復性實驗結果顯示,該方法組內(nèi)和組間變異系數(shù)均小于2%,重復性好。將NSs缺失型和非缺失型質粒分別轉染細胞,提取核酸,利用本方法進行檢測,結果顯示該方法可有效區(qū)分NSs基因缺失型和非缺失型核酸樣品。本研究建立的雙重熒光定量RT-PCR方法為鑒別野生病毒株和NSs缺失型疫苗株奠定了技術基礎。 

【文章來源】：中國預防獸醫(yī)學報. 2020,42(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑
    1.2 疫苗及相關病原
    1.3引物和探針的設計
    1.4 重組質粒標準品的構建
    1.5 雙重熒光定量RT-PCR方法反應體系的優(yōu)化及標準曲線的建立
    1.6 特異性試驗
    1.7 敏感性試驗
    1.8 重復性試驗
    1.9 對野生型和缺失型病毒核酸樣品的檢測
    1.10臨床樣品的檢測
2 結果
    2.1 雙重熒光定量方法的建立和優(yōu)化
    2.2標準曲線的建立
    2.3 特異性試驗結果
    2.4 敏感性試驗結果
    2.5 重復性試驗結果
    2.6 野生型和缺失型病毒核酸樣品的檢測
    2.7 臨床樣品的檢測
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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