微小隱孢子蟲可以感染人和其他多種哺乳動(dòng)物,造成世界范圍的水源性爆發(fā)。對(duì)免疫缺陷病人及五歲以下兒童危害尤其嚴(yán)重,甚至威脅其生命安全。目前對(duì)微小隱孢子蟲病還沒有有效的預(yù)防和治療方法。因此,尋找微小隱孢子蟲黏附及入侵宿主細(xì)胞相關(guān)的分子成為研究的關(guān)鍵。已有研究表明含有TSP1結(jié)構(gòu)域的血小板反應(yīng)蛋白家族（TSP蛋白家族）在頂復(fù)門原蟲與宿主相互作用的過程中扮演重要角色,可能成為預(yù)防或治療隱孢子蟲病的候選蛋白。本文選取微小隱孢子蟲TSP4蛋白質(zhì)作為研究對(duì)象,對(duì)該蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定并對(duì)其黏附功能進(jìn)行研究。通過對(duì)微小隱孢子蟲TSP4蛋白質(zhì)進(jìn)行生物信息學(xué)分析,選取特異性和免疫原性好的片段合成多肽:89KIKKADSWQEC99,通過MBS偶聯(lián)法將多肽偶聯(lián)到KLH以及BSA載體蛋白上。利用TSP4-KLH作為免疫原免疫BALB/c小鼠制備單克隆抗體,以TSP4-BSA作為檢測(cè)抗原篩選針對(duì)TSP4多肽的單克隆抗體,并鑒定單克隆抗體的亞型。提取卵囊,子孢子以及蟲體入侵HCT-8細(xì)胞不同時(shí)期的RNA進(jìn)行熒光定量PCR,分析其轉(zhuǎn)錄情況。通過Western blot對(duì)蟲體天然蛋白質(zhì)的表達(dá)情況進(jìn)行驗(yàn)證,然后利用間接免疫熒光... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

微小隱孢子蟲TSP4蛋白圖示

20圖 1.2 TSP4 swissmodel.expasy.org 及 iedb.org 分析結(jié)果紅色括號(hào)和箭頭所指示為選擇的多肽區(qū)域，方框?yàn)?B 細(xì)胞表位預(yù)測(cè)值Fig. 1.2 Analysis of TSP4 by swissmodel and iedb.orgThe red bracket and arrow indicate the selected peptide region, the box is the B cellepitope predicted1.3.2 Peptide-BSA 的偶聯(lián)采用 MBS 方法將多肽片段偶聯(lián)到載體蛋白 BSA 上，用 10% SDS-PAGE 鑒定偶聯(lián)情況。Peptide-BSA 用于檢測(cè)抗體效價(jià)，如圖 1.3 所示，遷移率的變化代

圖 1.3 Peptide-BSA 的偶聯(lián)Fig. 1.3 Conjugate of the Peptide-BS對(duì)血清抗體效價(jià)的檢測(cè)免疫 BALB/c 小鼠，以 Peptide-BSA /c 小鼠第三次免疫后的血清進(jìn)行效價(jià)標(biāo)為血清稀釋倍數(shù)。免疫前的血清作滿足（OD 實(shí)驗(yàn)組-OD 空白組）/（O

【參考文獻(xiàn)】：
博士論文
[1]惡性瘧原蟲和弓形蟲肝素結(jié)合蛋白質(zhì)組的比較分析[D]. 張巖.吉林大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3619041