滑液支原體（Mycoplasma synoviae, MS）是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的一種重要的病原微生物,其在世界各地的養(yǎng)雞場中均有分布,給養(yǎng)禽產(chǎn)業(yè)帶來了嚴(yán)重威脅。近年來的流行病學(xué)調(diào)查資料表明,滑液支原體感染呈擴(kuò)大和蔓延之勢,其危害亦日顯嚴(yán)重,甚至可能會超過雞毒支原體而成為危害養(yǎng)禽業(yè)頭號支原體病�；褐гw主要引起雞和火雞的呼吸道感染及關(guān)節(jié)炎,而蛋雞輸卵管的損傷亦被證實(shí)與滑液支原體有關(guān)。不同的毒力株滑液支原體的感染性、組織嗜性和致病性有所不同。因此,滑液支原體感染后可有不同的臨床表現(xiàn)。雖然滑液支原體的感染極少直接造成禽類的死亡,但其導(dǎo)致的生長遲滯,蛋殼畸形,死淘率上升、肉雞胴體廢棄率增加以及防控所需的大量投入,均可造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。而且,滑液支原體的感染可導(dǎo)致新城疫病毒、傳染性支氣管炎病毒、大腸桿菌及金黃色葡萄球菌等病原微生物的混合或繼發(fā)感染,從而使損失加劇。目前,由于尚無有效的疫苗可供使用,滑液支原體感染的防控主要通過加強(qiáng)生產(chǎn)管理,改善飼養(yǎng)條件和合理應(yīng)用抗生素等措施,但亦很難對該病完全控制和徹底清除。因此,開展滑液支原體相關(guān)的研究,必將為滑液支原體感染的有效預(yù)防和控制奠定理論基礎(chǔ)�；诖�... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 緒論
    1.1 支原體及滑液支原體
        1.1.1 支原體
        1.1.2 滑液支原體
    1.2 蛋白質(zhì)組學(xué)及其研究內(nèi)容、技術(shù)和在獸醫(yī)研究中的應(yīng)用
        1.2.1 蛋白質(zhì)組學(xué)研究的內(nèi)容
        1.2.2 蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)
        1.2.3 蛋白質(zhì)組學(xué)在獸醫(yī)研究中的應(yīng)用
    1.3 滑液支原體蛋白質(zhì)組學(xué)研究
    1.4 本研究的目的和意義
第二章 滑液支原體WV_(1853)株主要免疫相關(guān)膜蛋白的鑒定
    摘要
    2.1 材料與方法
        2.1.1 菌株和培養(yǎng)條件
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 培養(yǎng)基,主要緩沖液及試劑的配制
        2.1.5 滑液支原體的培養(yǎng)
        2.1.6 WVU_(1853)株兔多抗及雞多抗的制備
        2.1.7 制備膜蛋白
        2.1.8 蛋白質(zhì)的雙向電泳
        2.1.9 免疫印跡
        2.1.10 質(zhì)譜分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 MS WVU_(1853)株膜蛋白及親水蛋白的SDS-PAGE結(jié)果
        2.2.2 MS WVU_(1853)株膜蛋白的Western blot結(jié)果
        2.2.3 質(zhì)譜結(jié)果及數(shù)據(jù)分析
    2.3 討論
第三章 基于冰核蛋白N-端結(jié)構(gòu)域的大腸桿菌表面展示載體的構(gòu)建及在支原體粘附蛋白鑒定中的應(yīng)用
    摘要
    3.1 材料和方法
        3.1.1 菌種和質(zhì)粒
        3.1.2 細(xì)胞系
        3.1.3 化學(xué)試劑、酶及抗體
        3.1.4 主要儀器
        3.1.5 培養(yǎng)基,主要緩沖液及試劑的配制
        3.1.6 雞毒支原體的培養(yǎng)
        3.1.7 雞毒支原體基因組的粗提
        3.1.8 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.1.9 截短的冰核蛋白N-末端DNA序列的合成及質(zhì)粒構(gòu)建
        3.1.10 融合蛋白的表達(dá)
        3.1.11 EGFP熒光檢測
        3.1.12 大腸桿菌細(xì)胞的分級分離
        3.1.13 SDS-PAGE及Western blot分析
        3.1.14 免疫熒光顯微鏡觀察
        3.1.15 全菌的ELISA檢測
        3.1.16 InaZN-EGFP-Mgc2陽性表達(dá)菌對宿主細(xì)胞的粘附試驗(yàn)
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 細(xì)胞膜表面展示載體的構(gòu)建
        3.2.2 融合蛋白InaZN/EGFP及InaZN/EGFP/Mgc2的表達(dá)
        3.2.3 融合蛋白的定位
        3.2.4 重組的融合蛋白在細(xì)胞表面的展示
        3.2.5. 表面展示Mgc2的大腸桿菌對DF-1細(xì)胞的粘附
    3.3 討論
第四章 滑液支原體丙酮酸脫羧酶A亞基生物學(xué)特性研究
    摘要
    4.1 材料和方法
        4.1.1 菌種、載體
        4.1.2 抗體及實(shí)驗(yàn)動物
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要儀器
        4.1.5 培養(yǎng)基、主要緩沖液及試劑配制
        4.1.6 MS基因組的提取
        4.1.7 pdcA基因的克隆及載體的構(gòu)建
        4.1.8 pdcA基因的原核表達(dá)及蛋白純化
        4.1.9 PDCA兔多抗的制備
        4.1.10 PDCA在MS細(xì)胞內(nèi)的分布分析
        4.1.11 PDCA與Plg和Fn結(jié)合試驗(yàn)
        4.1.12 PDCA多抗介導(dǎo)的補(bǔ)體殺菌實(shí)驗(yàn)
        4.1.13 粘附及其粘附抑制實(shí)驗(yàn)
        4.1.14 PDCA~+Ecoli DF-1細(xì)胞的粘附及其粘附抑制實(shí)驗(yàn)
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 pdcA基因的克隆
        4.2.2 pdcA基因的表達(dá)
        4.2.3 pdcA基因表達(dá)產(chǎn)物的純化
        4.2.4 PDCA兔多抗效價(jià)的檢測
        4.2.5 PDCA在細(xì)胞內(nèi)的分布
        4.2.6 PDCA與雞的血纖溶酶原(Plg)和人的纖連蛋白(Fn)的結(jié)合活性
        4.2.7 PDCA多抗血清的體外殺菌實(shí)驗(yàn)
        4.2.8 PDCA抗血清的粘附抑制實(shí)驗(yàn)
        4.2.9 PDCA~+E.coli DF-1細(xì)胞的粘附及其粘附抑制實(shí)驗(yàn)
    4.3 討論
第五章 滑液支原體丙酮酸脫羧酶B亞基生物學(xué)特性研究
    摘要
    5.1 材料和方法
        5.1.1 菌種、載體
        5.1.2 抗體及及實(shí)驗(yàn)動物
        5.1.3 主要試劑
        5.1.4 主要儀器
        5.1.5 主要緩沖液及試劑配制
        5.1.6 MS基因組的提取
        5.1.7 pdcB基因的克隆及載體的構(gòu)建
        5.1.8 pdcB基因的原核表達(dá)
        5.1.9 重組蛋白的純化
        5.1.10 PDCB兔多抗的制備
        5.1.11 PDCB在MS細(xì)胞內(nèi)的分布
        5.1.12 PDCB與Plg和Fn結(jié)合試驗(yàn)
        5.1.13 His-PDCB多抗介導(dǎo)的補(bǔ)體殺菌實(shí)驗(yàn)
        5.1.14 粘附及其粘附抑制實(shí)驗(yàn)
        5.1.15 PDCB~+E.coli對DF-1細(xì)胞的粘附及其粘附抑制實(shí)驗(yàn)
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 pdcB基因的克隆
        5.2.2 pdcB基因的表達(dá)
        5.2.3 pdcB基因表達(dá)產(chǎn)物的純化
        5.2.4 His-PDCB兔多抗效價(jià)的檢測
        5.2.5 PDCB在細(xì)胞內(nèi)的分布
        5.2.6 纖溶酶原(Plg)及纖連蛋白(Fn)與His-PDCB的結(jié)合活性
        5.2.7 His-PDCB抗血清的體外殺菌實(shí)驗(yàn)
        5.2.8 PDCB抗血清的粘附抑制實(shí)驗(yàn)
        5.2.9 PDCB~+E.coli D F-1細(xì)胞的粘附及其粘附抑制實(shí)驗(yàn)
    5.3 討論
第六章 MS WVU_(1853)株pdcA/pdcB基因共表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及原核表達(dá)
    摘要
    6.1 材料和方法
        6.1.1 菌種、載體
        6.1.2 抗體
        6.1.3 主要試劑
        6.1.4 主要儀器
        6.1.5 主要緩沖液及試劑配制
        6.1.6 共表達(dá)載體的構(gòu)建
        6.1.7 pdcA及pdcB基因的原核共表達(dá)
        6.1.8 共表達(dá)蛋白的純化
        6.1.9 共表達(dá)產(chǎn)物酶活性測定
        6.1.10 pET-AB表達(dá)純化產(chǎn)物的酶促米氏常數(shù)
    6.2 結(jié)果
        6.2.1 pdcB基因的克隆
        6.2.2 pdcA及pdcB基因的共表達(dá)
        6.2.3 pdcB基因表達(dá)產(chǎn)物的純化
        6.2.4 共表達(dá)產(chǎn)物酶活性測定
        6.2.5 pET-AB表達(dá)純化產(chǎn)物的酶促米氏常數(shù)
    6.3 討論
第七章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]滑液支原體的危害或?qū)⒃龃骩J]. 于圣青.  中國家禽. 2013(17)
[2]蛋白質(zhì)組學(xué)方法及其在農(nóng)業(yè)生物科研領(lǐng)域的應(yīng)用[J]. 孔謙,陳中健,貝錦龍,崔百元,張衛(wèi)娜,賈諫,陳莊.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(15)
[3]Fibronectin: Functional character and role in alcoholic liver disease[J]. Razia S Aziz-Seible,Carol A Casey.  World Journal of Gastroenterology. 2011(20)
[4]多基因在大腸桿菌中的共表達(dá)策略[J]. 耿風(fēng)廷,趙曉瑜,高珊.  生物技術(shù)通訊. 2007(02)
[5]蛋白質(zhì)組學(xué)研究的內(nèi)容、方法及意義[J]. 司英健.  國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊. 2003(03)



本文編號：3619092